$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Preparação de amostras de tecido tumoral
- Fixe o tecido tumoral em formalina tamponada neutra a 10% (NBF) em um.
nota: O tecido tumoral de tumores pulmonares proximais é geralmente obtido por broncoscopia, realizada sob sedação moderada por um pneumologista ou especialista em pulmão. Para lesões periféricas e doença pulmonar difusa, uma biópsia transbrônquica ou por agulha é indicada. Esses procedimentos geralmente são feitos em uma sala de cirurgia ou unidade de terapia intensiva.
- Incorpore o em parafina.
nota: A fixação pode ser obtida por perfusão ou imersão imediatamente após a dissecção e normalmente requer de 8 a 10 h. O volume do fixador deve ser 15–20x maior que o volume da amostra. Não é recomendado fixar o tecido da biópsia por mais de 10 h, pois a fixação excessiva pode causar mascaramento do antígeno. A velocidade de fixação é de cerca de 1 mm/h à temperatura ambiente.
- Infiltre a amostra de tecido fixada com cera no processador de tecidos (consulte a Tabela de Materiais).
nota: A desidratação é realizada em três banhos de álcool com concentrações crescentes de 70%, 85% e 90%. A água é finalmente removida por três banhos finais de álcool absoluto. A limpeza é realizada em três banhos de tolueno e a infiltração de cera em banhos de cera quente (44–60 °C).
- Incorpore o tecido dentro de um molde preenchido com parafina derretida (consulte a Tabela de Materiais) e aguarde a solidificação.
- Corte o tecido embebido em parafina com uma espessura de 3 μm em um micrótomo.
- Transfira a fita de parafina para uma lâmina de vidro de microscópio carregada positivamente (consulte a Tabela de Materiais).
- Secar a lâmina durante 1 h a 37 °C.
Nota: Armazene as seções de tecido a 2–8 ° C (de preferência) ou em temperatura ambiente até 25 ° C para preservar a antigenicidade e core dentro de 15 dias após a secção.
2. Preparação de Amostras de Citologia
- Colete as lavagens brônquicas em uma solução conservante (ver Tabela de Materiais).
nota: Para isso, utiliza-se a técnica de broncoscopia padrão.
- Lave a distribuição do brônquio a ser amostrado. Recolha a lavagem em um recipiente limpo. Rotule o recipiente com o nome e sobrenome do paciente, data de nascimento e fonte da amostra.
- Transfira as lavagens brônquicas para um tubo cônico de 50 mL e adicione 2 g de pó de DL-Ditiotreitol (consulte a Tabela de Materiais), vortex o tubo por 30 min e, em seguida, centrifugue-o a 250 x g por 5 min em temperatura ambiente.
- Remova o sobrenadante e adicione 10 mL de uma solução mucolítica (ver Tabela de Material).
- Agitar a amostra durante 20 min a velocidade média (nível 9) e centrifugar a 250 x g durante 5 min à temperatura ambiente.
- Remova o sobrenadante e deposite o pellet celular em tubos de coleta contendo 10% de NBF.
- Adicione 4 gotas de um reagente de preparação de bloco celular (consulte a Tabela de Materiais) ao pellet celular.
- Transfira o pellet celular para um, fixe-o em 10% NBF e embuta-o em parafina para preparação e seccionamento do bloco celular (consulte as etapas 1.1–1.7).