Dinâmica do cálcio de imagem em células pancreáticas: uma técnica para estudar mudanças em tempo real na concentração citosólica de cálcio em ilhotas pancreáticas

Resumo

Fonte: Hamilton, A., et. al. Imaging Calcium Dynamics in Subpopulações de células de ilhotas pancreáticas de camundongos. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve a técnica de imagem de células de ilhotas em tempo real, para estudar as mudanças na concentração de cálcio citosólico nas subpopulações menores das células das ilhotas pancreáticas. Subpopulações de células menores podem ser identificadas usando respostas funcionais a compostos marcadores, como adrenalina e grelina, que induzem alterações no cálcio citosólico em populações específicas de células de ilhotas. Isso pode fornecer uma visão sobre a conversa cruzada entre a glicose no sangue e a saída secretora das ilhotas.

Protocolo

1. Carregue o corante ou expresse o sensor

1. Prepare o corante que pode ser capturado.
   1. Dissolva a alíquota (normalmente, 50 μg) do corante aprisionável (por exemplo, Fluo-4) em DMSO até uma concentração de estoque de 2 mM. Adicione ácido plurônico a uma concentração final de 1% (usando um estoque de 20% em DMSO), para melhorar a solubilização do corante.
   2. Alíquota do corante em pequenos tubos de PCR (2 μL em cada). O corante pode ser armazenado congelado (-20 °C) por várias semanas.
2. Como alternativa, prepare o sensor recombinante.
   1. Distribuir o sensor (por exemplo, vetor adenoviral que codifica GCaMP6f....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Objetivo 40x/1,3
GCaMP6f, em vetor adenoviral (tipo humano 5)	Biolabs de vetor	1910
Soro fetal bovino	Sigma-Aldrich	Rolamento F7524-500ML
RPMI médio	Thermo Fisher (GibCo, Life Technologies)	61870044
penicilina/estreptomicina	Thermo Fisher (GibCo, Life Technologies)	15140122
Microscópio Axiovert 200
Fluo4	Thermo Fisher (Tecnologias de Vida)	F14201