Indução de metaplasia acinar-ductal: um método para estudar a diferenciação de células acinares para células ductais em cultura 3D ex vivo

Resumo

Fonte: Fleming Martinez, A. K. et. al. Imitando e manipulando a metaplasia pancreática acinar-ductal em cultura de células tridimensionais. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve a técnica de diferenciação de células acinares pancreáticas em células ductais em cultura 3D ex vivo. Isso ajuda a entender os mecanismos que regulam a metaplasia acinar-ductal (ADM), um processo chave no desenvolvimento inicial do câncer de pâncreas.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação de Materiais, Soluções e Bases de Matrizes Tridimensionais

1. Corte malhas de polipropileno de 500 μm e 105 μm em quadrados de 76 mm por 76 mm. Dobre cada quadrado ao meio duas vezes para criar um quadrado dobrado menor. Coloque um quadrado de malha de 500 μm e um de 105 μm em uma bolsa autoclavável.
2. Quadrados de malha de polipropileno em autoclave, bem como dois pares de tesouras e pinças.
3. Faça 100 mL de solução 10x Waymouth.....

Resultados

Figura 1: Resultados representativos de células acinares primárias plaqueadas em colágeno após estimulação com TGF-α.Células acinares primárias de um camundongo não transgênico foram infectadas com GFP-adenovírus, incorpor.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
5% CO2, 37 °C Incubadora	NUAIRE	NU-5500
Tubos de 50 ml	falcão	Rolamento 352070
Copo, 600 mL	Marca de pescador	FB-101-600
Adenovírus Ad-GFP	Biolabs de vetor	1060
dexametasona	sigma	D1756	Criar uma solução de 4 mg/ml dissolvendo o pó em metanol, alíquota e armazenando a -20 °C
Soro fetal bovino	sigma	F0926-100mL
fórceps	Ferramentas de Belas Ciências	11002-12
Lâmina de vidro, 8 poços	Lab-Tek	177402
Balde de gelo, retangular	Fisher Científico	07-210-103
Matrigel	Corning	356234	Referido como 'matriz de membrana basal' no manuscrito.
Pbs	Fisher Científico	SH30028.02
Penicilina-estreptomicina	ThermoFisher Scientific	15140122
Placa, 12 poços	Corning Costar	3513
Placa, placa de 24 poços	Corning Costar	3524
Placa, 6 poços	falcão	353046
Malha de polipropileno, 105 μm	Laboratórios de espectro	146436
Malha de polipropileno, 500 μm	Laboratórios de espectro	146418
tesoura	Ferramentas de Belas Ciências	14568-12
Bicarbonato de sódio (pó branco fino)	Fisher Científico	BP328-500
hidróxido de sódio	Fisher Científico	S318-500
Inibidor de tripsina de soja	Gibco	17075029
Colágeno de cauda de rato tipo I	Corning	354236
PIPETMAN Classic P10, 1-10 μl	Gilson	F144802
Pipetas de 5 ml	falcão	357543
Ponteiras de pipeta, 10 μl	EUA Científico	1110-3700
Ponteiras de pipeta, 1000 μl	Plásticos Olympus	24-165RL
Ponteiras de pipeta, 200 μl	EUA Científico	1111-1700
Pipetas de 25 ml	falcão	357525
Pipeta-Auxiliar	Drummond
Pipetas de 10 ml	falcão	357551
PIPETMAN Classic P200, 20-200 μl	Gilson	F123601
PIPETMAN Classic P1000, 200-1000 μl	Gilson	F123602
PIPETMAN Classic P20, 2-20 μl	Gilson	F123600
Waymouth MB 752/1 Médio (pó)	sigma	W1625-10X1L
Barco de pesagem, hexagonal, médio	Marca de pescador	02-202-101