Artigo de método

Gerando modelo de camundongo PDOX de câncer colorretal: estudando a progressão do câncer colorretal em um modelo murino

30 de abril de 2023

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Moret, R. et al. Modelos de Xenoenxerto Ortotópico Derivados de Pacientes para Carcinoma de Células Urotheliais Humanas e Crescimento de Tumor de Câncer Colorretal e Metástase Espontânea. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve o protocolo para gerar um modelo de camundongo de câncer colorretal de xenoenxerto ortotópico derivado de paciente para estudar a progressão de células de câncer colorretal em camundongos diabéticos/imunodeficiência combinada grave (NOD/SCID) não obesos. Este modelo murino ajuda a entender o crescimento do tumor primário e o padrão de metástases.

Protocolo

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Todos os procedimentos envolvendo animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Cultura de linhagens celulares

  1. Cultive células HK em meio RPMI-1640 completo suplementado com 10% de soro fetal bovino, 2 nM de glutamina, 100 U/mL de penicilina G e 100 mg/mL de estreptomicina a 37 °C em uma incubadora umidificada com 5% de CO2.
    nota: As células HK são células dendríticas foliculares humanas normais e podem ser cultivadas e expandidas por ≤ 15 passagens in vitro.

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
RPMI-1640 MédioColeção American Type Culture110636
IsofluranoHenry Schein Saúde Animal108333
D-Luciferina (150 mg/kg)Perkin Elmer122796
glutamina (2 nM)Fisher Científico35050061
Luc/RFP-lentivírusDe nossos colaboradores. Ver referência 13: Gills, J. et al. Um modelo de xenoenxerto ortotópico derivado do paciente que permite o implante, crescimento, angiogênese e metástase do carcinoma de células uroteliais humano de alto grau do tumor da bexiga. Oncotarget. 9, 32718-32729, doi:10.18632/ oncotarget.26024 (2018).
penicilina/estreptomicina 100 mL (100 U/mL)Fisher Científico15140-122
gás
100% OxigênioAirgas IncOX USP200
100% CO2Airgas IncCD USPE
mouses
Camundongos NOD / SCID de 6 a 8 semanas (fêmea)Laboratório Jackson1303
Ferramentas
Tubo cônico de 15 mLSarstedtRolamento 11799
Placa de cultura de tecidos de 150 mmEUA Scientific IncCC7682-3614
fórcepsSimetria Cirúrgica Inc06-0011
Tesoura cirúrgicaSimetria Cirúrgica Inc02--2011
equipamento
Incubadora umidificada de 5% CO2Thermo Científico3110
Máquina de imagem bioluminescente (BLI)Perkin ElmerCLS136334
Software de máquina de imagem BLIPerkin ElmerCLS136335
Paquímetro digitalFerramentas e instrumentos FowlerTelefone: 54-115-330
Microscópio de dissecaçãoInstrumentos de precisão LLCTelefone: (504) 228-0076
Câmara de indução de isofluranoPerkin Elmer119038

Reimpressões e permissões

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Xenotransplante Ortot pico Derivado de PacienteModelo de C ncer ColorretalCamundongo NOD SCIDImagem BioluminescenteC lulas Marcadas com LuciferaseC lulas Dendr ticas FolicularesInje o Submucosal RetalAn lise de Met staseEstudo de Crescimento TumoralModelo Murino Imunocomprometido

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