Modelo de Ressecção Ileal Murina: Estudando o Metabolismo da Bílis Induzido por Ileectomia em Modelo Murino

Resumo

Fonte: Zhang, R., et al. Superacúmulo de bile induzido por ileectomia no intestino de camundongos. J. Vis. Exp. (2017)

Este vídeo descreve o protocolo detalhado para ressecção intestinal em um modelo murino. Essa técnica fornece informações sobre a má absorção, o acúmulo excessivo e a toxicidade da bile induzida por ileectomia no intestino de camundongos.

Protocolo

1. Ileectomia e Anastomose

1. Anestesiar camundongos com isoflurano (2 - 3%) em uma câmara de incubação de pequenos animais. Determine a anestesia adequada usando a técnica de pinça do dedo do pé enquanto o animal estiver tomando isoflurano.
2. Remova os pelos abdominais aplicando produtos de depilação e limpe os pelos com esponjas cirúrgicas, mantendo a anestesia. Coloque o camundongo em uma mesa cirúrgica de pequenos animais com temperatura controlada (Figura 1A) para manter a temperatura corporal a 37 °C. Mantenha a anestesia com isoflurano (1 - 2%) através de uma máscara facial. Trate os olhos do rato com pomada ocular.
3. Limpar a pele com iodopovidona e álcool 70% e cobrir a área cirúrgica do abdome com gaze cirúrgica estéril (Figura 1B).
4. Faça uma incisão abdominal na linha média usando um bisturi cirúrgico assim que a anestesia estiver em vigor. Use um aplicador com ponta de algodão para proteger o intestino e puxe o músculo abdominal do camundongo com afastadores para abrir e expor totalmente a cavidade abdominal (Figura 1C).
5. Localize o ceco. A partir do ceco, mova cuidadosamente o íleo conectado e parte do jejuno para fora da cavidade abdominal (Figura 1D).
   nota: O ceco pode ser facilmente identificado devido ao seu grande tamanho, mesmo após o jejum.
6. Ligue o ramo superior da artéria mesentérica superior com uma sutura de seda 7-0 para ocluir o sangue que irriga o segmento ileal a ser excisado. A cor ileal muda de rosa para roxo escuro após a ligadura. (Figura 1E - F).
7. Dependendo do objetivo do experimento, com tesoura, excisar e remover 50% ou 90% do íleo.
   nota: Para cirurgia simulada, não realize a ligadura da artéria mesentérica superior e não remova o íleo.
8. Lave o lúmen de ambas as extremidades ileais com soro fisiológico 0,9%.
   nota: Como o íleo intacto restante ainda está recebendo um suprimento sanguíneo normal da artéria mesentérica superior, uma pequena quantidade de sangue será expelida durante o processo. Isso também indica que o suprimento sanguíneo para as extremidades ileais é normal e garante que não haja isquemia durante o procedimento de anastomose (Figura 1G).
9. Localize os mesentérios ao lado de ambas as extremidades ileais. Alinhe os mesentérios e suture as extremidades ileais usando 8-0 sutura (Figura 1G - H).
10. Suturar o lado contralateral do íleo para mantê-lo anastomosado de maneira natural (Figura 1I).
11. Suture os lados superior e inferior entre as duas suturas originais para unir completamente as duas extremidades ileais (Figura 1J).
12. Confirme se não há vazamento do local da anastomose após terminar o procedimento de sutura em três etapas (Figura 1G-I). Retorne o ceco e o intestino delgado para a cavidade abdominal para o local anatômico original. Lave a área da cirurgia com solução salina morna a 0,9% usando uma agulha romba. (Figura 1K).
13. Feche a incisão da camada muscular abdominal com uma sutura 6-0. Alinhe a incisão da pele abdominal usando uma pinça e suture a pele abdominal para facilitar a cicatrização ideal da ferida (Figura 1L).

2. Cuidados pós-operatórios

1. Transfira os camundongos pós-operatórios para uma unidade de terapia intensiva para recuperação. Coloque-os em uma gaiola de cama de papel em uma almofada de aquecimento com temperatura controlada para continuar a recuperação pós-cirúrgica durante a noite. Forneça aos ratos alimentos macios, além de comida e água regulares.
2. Administrar buprenorfina (0,05 - 0,1 mg/kg) com injeção subcutânea a cada 8-12 h para analgesia.
   nota: Eutanasiar camundongos com CO₂ se estiverem gravemente doentes.
3. No ponto final, sacrifique camundongos usando isoflurano com overdose e colete amostras conforme necessário (seção 3).

3. Avaliação do superacúmulo biliar induzido por ileectomia

1. Pese e disseque os camundongos um dia após a ressecção de 0% (simulação), 50% ou 90% do íleo.
2. Remova o trato gastrointestinal e pese-o. Calcule a relação peso GI / peso corporal para avaliar a gravidade da má absorção e superacumulação de sais biliares.
3. Transfira os tratos gastrointestinais para tubos cônicos de 15 mL e corte-os em segmentos curtos usando uma tesoura. Após o corte, centrifugue a 3.000 x g por 10 min. Transfira o sobrenadante (fluido gastrointestinal contendo sais biliares) para um tubo limpo.
4. Meça o volume total e o peso do fluido gastrointestinal e calcule a relação entre o peso do fluido e o peso do trato gastrointestinal para avaliar melhor o acúmulo excessivo de bile no trato gastrointestinal.
5. Determinar a quantidade total de bílis no sobrenadante por ensaio de ácido biliar.

Resultados

Figura 1: Procedimentos cirúrgicos de ileectomia. (A) Mantenha a temperatura corporal usando uma mesa cirúrgica de pequenos animais com temperatura controlada. (B) Cubra a área da cirurgia com gazes estéreis após o preparo da pele abdominal. (C) Exponha o intestino delgado através de uma incisão abdominal na linha média. (D) Cecum (destacado pela linha tracejada branca) é marcado para loc...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
C57BL/6J	O Laboratório Jackson
Microscópio de dissecção	Olimpo	SZ61	Para cirurgia
Controlador de temperatura para animais	Physitemp Instruments, Inc	TCAT-2LV	Para controle de temperatura corporal
Vaporizador anestésico de isoflurano	VetEquip	911104	Para anestesia
Pinça de dissecção	Ferramentas de Belas Ciências, Inc.	11274-20	Para cirurgia
tesoura	Ferramentas de Belas Ciências, Inc	14084-08	Para cirurgia
Porta-agulhas	Roboz Instrumento Cirúrgico Co.	RS-7882	Para cirurgia
Micro facas-lâmina da agulha	Fisher Científico	10318-14	Para cirurgia
Sutura monofilamentar 6-0	Ética	1698G	Para fechamento da pele abdominal
7-0 sutura de seda	Ética	766 ouros	Para ligadura
Sutura de monofilamento 8-0	Ética	1714 OUROS	Para anastomose
Esponjas cirúrgicas	Dynarex Corp.	3333	Para cirurgia
Aplicadores pequenos com ponta de algodão	Fisher Científico	23-400-118	Para cirurgia
Isoflurano	Piramal Saúde Limitada	Nº 66794-013-25	Para anestesia
Cloridrato de buprenorfina	Reckitt-Benckiser Farmacêutica	12496-0757-1	Para analgesia
Injeção de cloreto de sódio a 0,9%	B. Braun Medical Inc.	Telefone: 0264-7800-10	Para lavagem/injeção
Solução de preparação de iodopovidona	Dynarex Corp.	1413	Para preparação da pele
Pomada veterinária Puralube	Dechra Produtos Veterinários	17033-211-38	Para proteção dos olhos
Loção removedora de pelos	Igreja & Dwight Co., Inc.		Para preparação da pele
Unidade de terapia intensiva	ThermoCare	FW-1	Para recuperação pós-cirúrgica
Kit de ensaio de ácidos biliares totais	Genzyme Diagnóstico	DZ042A-K01	Para o ensaio de ácidos biliares