1. Ileectomia e Anastomose
- Anestesiar camundongos com isoflurano (2 - 3%) em uma câmara de incubação de pequenos animais. Determine a anestesia adequada usando a técnica de pinça do dedo do pé enquanto o animal estiver tomando isoflurano.
- Remova os pelos abdominais aplicando produtos de depilação e limpe os pelos com esponjas cirúrgicas, mantendo a anestesia. Coloque o camundongo em uma mesa cirúrgica de pequenos animais com temperatura controlada (Figura 1A) para manter a temperatura corporal a 37 °C. Mantenha a anestesia com isoflurano (1 - 2%) através de uma máscara facial. Trate os olhos do rato com pomada ocular.
- Limpar a pele com iodopovidona e álcool 70% e cobrir a área cirúrgica do abdome com gaze cirúrgica estéril (Figura 1B).
- Faça uma incisão abdominal na linha média usando um bisturi cirúrgico assim que a anestesia estiver em vigor. Use um aplicador com ponta de algodão para proteger o intestino e puxe o músculo abdominal do camundongo com afastadores para abrir e expor totalmente a cavidade abdominal (Figura 1C).
- Localize o ceco. A partir do ceco, mova cuidadosamente o íleo conectado e parte do jejuno para fora da cavidade abdominal (Figura 1D).
nota: O ceco pode ser facilmente identificado devido ao seu grande tamanho, mesmo após o jejum.
- Ligue o ramo superior da artéria mesentérica superior com uma sutura de seda 7-0 para ocluir o sangue que irriga o segmento ileal a ser excisado. A cor ileal muda de rosa para roxo escuro após a ligadura. (Figura 1E - F).
- Dependendo do objetivo do experimento, com tesoura, excisar e remover 50% ou 90% do íleo.
nota: Para cirurgia simulada, não realize a ligadura da artéria mesentérica superior e não remova o íleo.
- Lave o lúmen de ambas as extremidades ileais com soro fisiológico 0,9%.
nota: Como o íleo intacto restante ainda está recebendo um suprimento sanguíneo normal da artéria mesentérica superior, uma pequena quantidade de sangue será expelida durante o processo. Isso também indica que o suprimento sanguíneo para as extremidades ileais é normal e garante que não haja isquemia durante o procedimento de anastomose (Figura 1G).
- Localize os mesentérios ao lado de ambas as extremidades ileais. Alinhe os mesentérios e suture as extremidades ileais usando 8-0 sutura (Figura 1G - H).
- Suturar o lado contralateral do íleo para mantê-lo anastomosado de maneira natural (Figura 1I).
- Suture os lados superior e inferior entre as duas suturas originais para unir completamente as duas extremidades ileais (Figura 1J).
- Confirme se não há vazamento do local da anastomose após terminar o procedimento de sutura em três etapas (Figura 1G-I). Retorne o ceco e o intestino delgado para a cavidade abdominal para o local anatômico original. Lave a área da cirurgia com solução salina morna a 0,9% usando uma agulha romba. (Figura 1K).
- Feche a incisão da camada muscular abdominal com uma sutura 6-0. Alinhe a incisão da pele abdominal usando uma pinça e suture a pele abdominal para facilitar a cicatrização ideal da ferida (Figura 1L).
2. Cuidados pós-operatórios
- Transfira os camundongos pós-operatórios para uma unidade de terapia intensiva para recuperação. Coloque-os em uma gaiola de cama de papel em uma almofada de aquecimento com temperatura controlada para continuar a recuperação pós-cirúrgica durante a noite. Forneça aos ratos alimentos macios, além de comida e água regulares.
- Administrar buprenorfina (0,05 - 0,1 mg/kg) com injeção subcutânea a cada 8-12 h para analgesia.
nota: Eutanasiar camundongos com CO2 se estiverem gravemente doentes.
- No ponto final, sacrifique camundongos usando isoflurano com overdose e colete amostras conforme necessário (seção 3).
3. Avaliação do superacúmulo biliar induzido por ileectomia
- Pese e disseque os camundongos um dia após a ressecção de 0% (simulação), 50% ou 90% do íleo.
- Remova o trato gastrointestinal e pese-o. Calcule a relação peso GI / peso corporal para avaliar a gravidade da má absorção e superacumulação de sais biliares.
- Transfira os tratos gastrointestinais para tubos cônicos de 15 mL e corte-os em segmentos curtos usando uma tesoura. Após o corte, centrifugue a 3.000 x g por 10 min. Transfira o sobrenadante (fluido gastrointestinal contendo sais biliares) para um tubo limpo.
- Meça o volume total e o peso do fluido gastrointestinal e calcule a relação entre o peso do fluido e o peso do trato gastrointestinal para avaliar melhor o acúmulo excessivo de bile no trato gastrointestinal.
- Determinar a quantidade total de bílis no sobrenadante por ensaio de ácido biliar.