Ensaio de citometria de tração: um método para quantificar a força de tração exercida por células cancerígenas na ECM

Neste artigo

Resumo

Fonte: Ali, M. Y., et al. Isolamento de células tumorais primárias do cólon humano de tecidos cirúrgicos e cultura-as diretamente em substratos elásticos macios para citometria de tração. J. Vis. Exp. (2015).

Este vídeo descreve o ensaio de microscopia de força de tração. O ensaio determina a tração celular das células cancerígenas do cólon humano na matriz extracelular presente no hidrogel elástico macio com esferas fluorescentes incorporadas. O deslocamento resultante de grânulos fluorescentes é medido usando um software apropriado.

Protocolo

1. Ensaio de Microscopia de Força de Tração

Aqueça a solução de tripsina-EDTA/SDS a 10% a 0,25% a 37 °C em banho-maria por 10 minutos antes do início dos experimentos de tração.
Remova um gel (Funcionalize géis de PA e vidro com moléculas de ECM, fibronectina humana a uma concentração de 50 μg/ml) da incubadora de cultura de células em um momento e local no microscópio invertido fluorescente stage (ampliação de 32X).
Encontre uma única célula no campo de visão. Remova a tampa da placa de Petri.
Tire uma imagem de contraste de fase da célula (por exemplo, Figura 1).
Mude o mo....

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Resultados

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Figura 1. Cultura de células primárias de cólon humano bem-sucedida (câncer e normal) em diferentes géis de rigidez e em placa de poliestireno. As imagens de contraste de fase mostram a morfologia típica de (A) células tumorais e (B) células normais em diferentes substratos de rigidez.