Cultura Rápida de Melanócitos Murinos Primários e Fibroblastos: Isolamento de Melanócitos e Fibroblastos de Amostra de Pele Murina Inteira

Resumo

Fonte: Murphy, B. M. et al. Geração Rápida de Culturas Primárias de Melanócitos Murinos e Fibroblastos. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo descreve o método rápido para isolar e cultivar os melanócitos e fibroblastos simultaneamente da pele do filhote de camundongo pós-natal. Essas células podem ser mantidas e manipuladas in vitro para estudar a biologia celular da pele, cicatrização de feridas e melanoma.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Isolamento de melanócitos e fibroblastos

1. Eutanasiar filhotes C57Bl/6J machos e/ou fêmeas de 0 a 4 dias de idade por decapitação e remover as extremidades dos camundongos sacrificados usando tesouras cirúrgicas.
2. Em um gabinete de fluxo laminar, role brevemente o tronco de cada camundongo em uma placa de Petri estéril contendo 70% de etanol. Remova o tronco do etanol e coloque-o em uma placa de Petri vazia e estéril.
3. Usando uma teso....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Etanol, 200 provas	Fisher Científico	22032601
Solução Antimicótica Antibiótica (100x)	Sigma-Aldrich	Rolamento A5955
Picador de Tecidos McIlwain	Ted Pella	Rolamento 10180
Lâmina de picador de tecido	Ted Pella	121-6
Disco de plástico picador de tecido	Ted Pella	Rolamento 10180-01
Colagenase Tipo I	Bioquímicos Worthington	LS004156
Tripsina suína	Sigma-Aldrich	85450C
tripsina	VWR	VWRL0154-0100
Dissulfeto G418	P212121	LGB-418-1
Meio Eagle Modificado de Dulbecco	Gibco	Rolamento 12800-082
Mídia RPMI 1640	Sigma-Aldrich	R8758
Solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco	Sigma-Aldrich	D8537
Placa de cultura de células de 6 poços	Sigma-Aldrich	SIAL0516
Tubos de fundo redondo de poliestireno de 5 mL	Fisher Científico	352008
Placa de cultura de células de 10 cm	Corning	430167
Albumina de soro bovino	Fisher Científico	BP9706-100
Soro fetal bovino	Sigma-Aldrich	12306C
Solução de penicilina/estreptomicina Corning	Fisher Científico	30-002-CL
Mistura de Nutrientes F-12 Mídia de Presunto	Sigma-Aldrich	N6760
Colágeno da cauda de rato	Sigma-Aldrich	C7661
Filtro de seringa estéril PES de 0,2 μm	VWR	Rolamento 28145-501
Filtro de células de 40 μm	Fisher Científico	22363547
Filtro de células de 70 μm	Fisher Científico	22363548
Toxina da cólera	Sigma-Aldrich	C8052
Soro de Cavalo	Fisher Científico	26050088
HyClone L-Glutamina	Fisher Científico	SH3003402