Ensaio de dose eritematosa mínima: um método para medir a sensibilidade UV em modelos de camundongos

Resumo

Fonte: Amaro-Ortiz, A. et al. Indução farmacológica de melanina epidérmica e proteção contra queimaduras solares em modelo de camundongo humanizado. J. Vis. Exp. (2013)

Este vídeo descreve um método para medir a sensibilidade aos raios UV em um modelo de camundongo humanizado - um modelo de camundongo que imita a pele humana. Determinamos a dose eritematosa mínima (MED) de radiação UV que pode causar eritema ou edema na pele. O método pode ajudar a descobrir a eficácia dos medicamentos usados para reduzir a sensibilidade aos raios UV.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

Determinação da sensibilidade aos raios UV pelo cálculo da "dose eritematosa mínima" (MED)

1. Use animais que tenham sido pré-tratados com veículo ou forscolina. Anestesiar os animais com injeção intraperitoneal de uma mistura padrão de cetamina e xilazina.
2. Prepare um pedaço de fita oclusiva UV para o teste MED. Para fazer furos na fita, use um furador resistente com um corte circular de 1 cm² (Figuras 1A e B). Ter orifícios de tamanho definido e arranjo simétrico na fita facilita o reconhecimento de alterações na pele após a irradiação. Sobre cada orifício da fita, aplique um pedaço de fita pequeno, mas facilmente destacável, que pode ser removido em momentos definidos durante a exposição aos raios UV para permitir a administração de diferentes doses de raios UV.
3. Assim que os animais estiverem adequadamente sedados, coloque a fita na superfície dorsal. O lubrificante ocular deve sempre ser utilizado sob anestesia.
4. Ligue a fonte UV composta por duas lâmpadas Westinghouse F15T8UV-B com uma potência de pico de 313 nm e uma faixa de 280-370 nm. Deixe a lâmpada se equilibrar a uma saída UV constante, medida por um fotômetro UV com um sensor UVB (geralmente leva alguns minutos para as lâmpadas aquecerem).
5. Com base na taxa de transmissão UV medida pelo fotômetro UV, calcule o tempo de exposição UV para cada dose desejada. Por exemplo, a saída UVB da nossa lâmpada mede 2,4 mW/cm². Portanto, para administrar 5 kJ/m², a pele precisaria ser exposta a 208 segundos (que são 3 min e 28 segundos) de radiação UVB, conforme calculado abaixo:
   
6. Coloque os animais sedados (cada um com fita oclusiva no lugar) na superfície ventral para baixo para garantir uma exposição uniforme aos raios UV. Para administrar as doses escolhidas de radiação UV, remova sequencialmente as pequenas fitas oclusivas que cobrem os orifícios para expor áreas de 1 cm² da pele às doses corretas de radiação. Portanto, usando o exemplo acima, se 40 kJ / m² é a maior dose no experimento, então o animal ficaria sob a lâmpada por 27 min e 47 segundos no total e a pele na condição de 40 kJ / m² não teria fita sobreposta o tempo todo. No entanto, a fita sobreposta à condição de 5 kJ/m² seria removida quando houvesse 208 segundos restantes na exposição. O tempo de remoção da fita deve ser tal que cada condição termine simultaneamente.
7. Após a exposição aos raios UV, retire a fita da pele dorsal com cuidado, tomando cuidado para não rasgar a pele com movimentos bruscos ou excessivamente fortes. Coloque os animais em um local quente e silencioso para permitir a recuperação da anestesia.
8. Monitore os camundongos por 24-48 horas para procurar áreas discretas de eritema (vermelhidão) ou edema (inchaço) correspondentes aos locais anatômicos expostos à dose específica de irradiação UV. Documente os achados da pele fotograficamente.
9. O valor MED corresponde à dose mínima de UV que causa inflamação, definida por eritema e/ou edema de todo o círculo exposto da pele. Observe que a pigmentação da pele pode desafiar a determinação da MED, no entanto, o eritema e o edema ainda podem ser avaliados com precisão, graças em parte à forma definida das aberturas na fita durante a exposição aos raios UV.

Resultados

Figura 1. A melanização induzida por forscolina protege contra a inflamação mediada por UV, conforme determinado pelo teste de dose eritematosa mínima (MED). (A, B) Posição da fita oclusiva UV e das doses de UVB de animais tratados duas vezes ao dia por 5 dias (A,C) ou uma vez ao dia por 15 dias (B,D,E) com veículo ou forscolina. O último tratamento tópico foi aplica...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
xilazina	Injeção analisada	LA04612	Shenandoah, Iowa, EUA
Cetamina HCl, USP	Putney	NDC 26637-411-01	São José, MO, EUA
etanol	Laboratórios Decon.	2705
Creme depilatório, Nair	Igreja Dwight	JF-11 4381322	Priceton, Nova Jérsia
Lâmpada Germicida Hg UV-B	Westinghouse	F15T8UV-B
Fotômetro radiômetro	Luz internacional	1LT400A	Peabody, MA, EUA
Isothesia, Isoflurano, USP	Mordomo Schein	NCD 11695-6776-1	Dublin, OH, EUA
Cromatômetro	Konica Minolta	CR-400	Ramsey, Nova Jersey, EUA
Processador de dados para cromâmetro CR-400	Konica Minolta	DR-400	Ramsey, Nova Jersey, EUA