Imagem crônica de rato Visual Cortex usando uma preparação diluída crânio-

Summary

Neste material de vídeo e suplementar, vamos mostrar um protocolo para a crônica In vivo Imagem do cérebro intacto utilizando uma preparação diluída crânio.

Abstract

In vivo de imagens utilizando dois fótons microscopia de varredura a laser (2PLSM) permite o estudo de células vivas e processos neuronais no cérebro intacto. A técnica apresentada aqui permite que a imagem da mesma área do cérebro em momentos diversos (imagem crônica) com resolução microscópica permitindo o rastreamento de espinhas dendríticas, que são as pequenas estruturas que representam a maioria dos pós-sináptica excitatória locais no sistema nervoso central. A capacidade de resolver claramente multa estruturas cortical sobre vários intervalos de tempo tem muitas vantagens, especificamente no estudo da plasticidade do cérebro em que as alterações morfológicas nas sinapses e remodelação do circuito pode ajudar a explicar os mecanismos subjacentes. Neste material de vídeo e suplementares, mostramos um protocolo para a crônica in vivo de imagens do cérebro intacto utilizando uma preparação diluída crânio. A preparação diluída crânio-se de uma abordagem minimamente invasiva, o que evita possíveis danos à dura e / ou córtex, reduzindo assim o aparecimento de uma resposta inflamatória. Quando este protocolo é realizado corretamente, é possível monitorar claramente mudanças nas características espinha dendrítica no cérebro intacto por um período prolongado de tempo.

Protocol

1. Para visualizar os neurônios no cérebro intacto utilizando dois fótons de microscopia, uma preparação, onde os neurônios são marcados com marcadores fluorescentes é utilizado. Nos experimentos apresentados aqui usamos o GFP-M linha camundongo transgênico que rotula camada 5 células piramidais ^1. Camada 5 células piramidais projeto processos dendríticos em camadas superficial, permitindo a visualização dos dendritos e espinhas dendríticas até uma profundidade de 300 mm abaixo do nível da pia. Uma abordagem alternativa é a células etiqueta usando marcadores virais (ver Lowery et al., Submetidos a JOVE).
2. Esterilizar o espaço de trabalho usando etanol 70% e....

Discussion

Imagem crônica utilizando dois fótons de microscopia está se tornando uma técnica cada vez mais popular para estudar alterações morfológicas desencadeadas durante ^2-5 plasticidade. Aqui nós demonstramos uma preparação diluída crânio-a seguir identificados espinhas dendríticas no cérebro do rato intacta nos dias de imagens diferentes. Neste protocolo, o crânio é deixada intacta, causando danos mínimos para o córtex, resultando em níveis muito baixos de neuroinflamação que podem alterar a função cerebral ^6.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Citrato		em casa		Coquetel de fentanil: coquetel anestésico; Dose IP: 0,0125 ml/g Teor final do coquetel: 0,05 mg/kg
Cloridrato		In House		: Coquetel Anestésico; IP Dose: 0,0125 ml/g Embalagem final do coquetel: 0,05 mg/kg
Midazolam HCL		Coquetel de		: Coquetel anestésico; Dose IP: 0,0125 ml/g Recipiente final do coquetel: 0,05 mg/kg
2,2,2-tribrom– thanol				Avertin Cocktail: Anestésico; Dose IP: 0,0075 cc/ g Embalagem final do coquetel: 1%
2-metil-2-butanol (Concentração final: 0,775%)				Coquetel Avertin: Anestésico; IP Dose: 0,0075 cc/g Final coquetel conc.: .775%
TC-1000 Temp. Sistema de Controle para Camundongos		CWE, Inc.	TC-1000 Temp	. Temperatura do corpo
Toberadex		In House		Eye Pomada
10% Cloreto		Ricca Chemical Company	3120-32	Lâmina
	microcirúrgica	Sable Industries	S-6400	Preparação de crânio fino
Cianoacrilato 404.401		Loctite	P / N 46551	Preparação de crânio fino
Cianoacrilato 401		Loctite	P/N 40140	Preparação de crânio fino
Cola Zip Kicker	Tecnologia Accelerator		Pacer PT-29	Preparação de crânio fino
Micro Broca Aço Rebarbas Diâmetro		Ferramentas de Ciência Fina	19008-07	Preparação de crânio fino
Caixa de Controle de Microtorque e Peça	de Mão Tech2000	Produtos Ram, Inc.	TECH2000ON / OFF	Preparação de crânio fino
# 6-0 (0,7 métrico) sutura		Ethicon Inc.	K8894H	Ca C-1
Pinça de Curativo para Olhos, 10cm, largura da ponta 0.5mm, curvada	Ferramentas Cirúrgicas	Ferramentas Fine Science	Tools 11152-10
Tesoura Bonn Extra Fina, 8.5cm, ponta reta, borda de corte Ferramentas Cirúrgicas de 13mm		Ferramentas Fine Science	Tools 14084-08
Fórceps de Padrão Padrão, reta, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm	Ferramentas Cirúrgicas	Ferramentas Fine Science	11000-12