Este vídeo demonstra uma abordagem ambiente controlado para estudo de degradação dos tecidos vegetais lignocelulósicas por fungos aeróbicos. A capacidade de controlar fontes de nutrientes e umidade é uma das principais vantagens da ágar-bloco microcosmos, mas a abordagem geralmente produz sucesso misturado. Nós endereço armadilhas fundamental para o rendimento reprodutível, a variabilidade de baixa resultados.
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Artigo de método
Agar-Microcosmos Bloco de decomposição controlada de Tecidos Vegetais por fungos aeróbicos
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Neste artigo
Resumo
Resumo
Os dois principais métodos para o estudo de biodegradação por fungos dos tecidos vegetais lignocelulósicas foram desenvolvidos para testes de madeira conservante (solo-bloco; agar-bloco). É bem aceito que o solo-bloco microcosmos rendimento maiores taxas de decomposição, menos problemas de umidade, menor variabilidade entre os estudos, e os limites mais altos de toxicidade conservante. Solo-bloco de teste é, portanto, a técnica mais utilizada e foi padronizado pela American Society for Testing and Materials (ASTM) (método D 1413-07). O projeto solo-bloco tem desvantagens, no entanto, utilizando fontes do solo localmente variável e em limitar o controle de nutrientes externos (exógenos) para os tecidos em decomposição. Estas desvantagens têm emergido como um problema na aplicação deste método para outros, objectivos de investigação cada vez mais popular. Estes objectivos modernos incluem lignocelulose degradante para pesquisa de bioenergia, biorremediação de testes de co-metabolizado tóxicos, avaliando mecanismos oxidativos e acompanhamento de elementos translocada ao longo das redes de hifas. Solo-blocks não se prestam controle suficiente nestas aplicações. Uma abordagem agar-bloco refinado é necessário.
Aqui, usamos a podridão parda madeira degradante fungo Serpula lacrymans de degradar a madeira em ágar-bloco microcosmos, utilizando pratos de Petri profunda com o cálcio de baixa agar. Nós testamos o papel do exógeno gesso em decadência em uma série de tempo, para demonstrar a utilidade e variabilidade esperada. Blocos de uma única placa de rip (corte longitudinal) são condicionados, pesado, autoclavado, e introduziu assepticamente em cima de malha de plástico. Inoculações com fungos estão em cada face do bloco, com gesso exógenas adicionadas às interfaces. Colheitas são assépticas até a colheita final destrutivo. Estes microcosmos são projetados para evitar o contacto bloco com agar ou paredes placa de Petri. Condensação é minimizada durante a derrama e placa durante a incubação. Finalmente, inóculo / gesso / madeira espaçamento é minimizada, mas sem permitir contato. Estes aspectos menos técnica do agar-block design são também as causas mais comuns de fracasso e a principal fonte de variabilidade entre os estudos. Publicação de vídeo é, portanto, útil, neste caso, e demonstrar a variabilidade de baixa e de alta qualidade resultados.
Protocolo
Este protocolo aplica-se a substratos lenhosos e não lenhosos, como descrito, bem como ao material forno ou seca ao ar. Leia o primeiro protocolo, no entanto, antes de set-up. Há vários pontos levantados que podem ser aplicadas para o seu estudo, e esses pontos (sublinhado) exigem planejamento. Além disso, observe que existem dois publicados agar-bloco métodos que são usados ocasionalmente, um a British Standard 838 e outro na sequência de um Grupo de Pesquisa Internacional sobre Proteção Wood (IRG WP) documento apresentado pela Bravery (1978). Nosso método se assemelha a 838, com modificações principalmente na concepção microcosmo eo controle do meio de agar, mas,....
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Discussão
Usando nosso agar-bloco set-up (Figura 1) Serpula lacrymans cresceu em contato direto com as superfícies de gesso e em blocos de madeira (Figura 2), levando a mais de 60% na perda de peso o marrom-apodreceu controle de blocos de pinho (Figura 3 ). Isso facilmente satisfaz o objetivo da norma ASTM> decaimento de 50%, eo coeficiente médio de variação (C V) em decadência na era 0,055 na semana 16. Estes dados estão publicados no Schilling 7. Mais uma vez, outros fungos exigirá mais tempo.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Placas de Petri | Nalge Nunc international | 4014 | 25 x 150 mm |
| Ágar, tipo A | Sigma-Aldrich | A4550 | |
| Nitrato de amônio, NH4NO3 | Millinckrodt | 3436-12 | |
| Fosfato de potássio, KH2PO4 | JT Baker | 3246-01 | |
| Sulfato de magnésio heptaidratado, MgSO4•7H2O | Sigma-Aldrich | 230391 | |
| D-(+)-Glicose | Sigma-Aldrich | G8270 | Dextrose |
| Ácido bórico, H3BO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 2549-04 | |
| Sulfato de zinco heptaidratado, ZnSO4•7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 8880-12 | |
| Cloreto manganoso tetraidratado, MnCl2•4H2O | JT Baker | 2540-04 | |
| Sulfato de cobre(II) pentaidratado, CuSO4•5H2O | Sigma-Aldrich | 209198 | |
| Heptamolibdato de amônio tetraidratado, (NH4)6Mo7O24•4H2O | Sigma-Aldrich | 431346 | |
| Cloreto de cálcio diidratado, CaCl2•2H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 4160-12 | |
| Cloreto de sódio, NaCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 7581-12 | |
| Sulfato ferroso heptaidratado, FeSO4•7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 5056-12 | |
| Pipetador | Drummond Scientific | 4-000-110 | Sem fio EtOH na superfície |
| Pipeta estéril de poliestireno de 10 ml | BD Biosciences | 357551 | |
| Protetor de calha | Thermwell Products Co. | VX620 | Pré-esfregado com sabão Loja de material de construção |
| Sulfato de cálcio hemi-hidratado, CaSO4•0,5H2O | Acros Organics | 385355000 | |
| Berbequim de cortiça nº 4 | Boekel Scientific | 1601 | |
| Parafilm "M" | Pechiney Plastic Packaging | PM-996 |
Referências
- ASTM D1413-07. Standard test method for testing wood preservatives by laboratory soil-block cultures. . Annual Book of ASTM Standards. , 185-192 (2007).
- Bravery, A. F. A miniaturized wood block for the rapid evaluation of wood preservative fungicides. , International Research Group on Wood Protection (IRG/WP 2113). (1978).
- Low, G. A., Young, M.....
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Reimpressões e permissões
