Artigo de método

In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de ratos E16

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DOI:

10.3791/236

19 de julho de 2007

Neste artigo

Resumo

Intra-uterina in vivo de injeção e eletroporação do neocórtex de ratos embrionários fornece uma ferramenta poderosa para a manipulação de células progenitoras individuais que revestem as paredes do ventrículo lateral. Esta técnica é amplamente utilizada para estudar os processos envolvidos na corticogenesis por excesso de expressar ou derrubando genes e observando os efeitos sobre a proliferação celular, migração e diferenciação. Em comparação com as estratégias tradicionais de knockout, in-utero eletroporação fornece um meio rápido para manipular uma população de células durante uma janela específica temporal. Neste protocolo de vídeo, destacamos a metodologia experimental para a preparação para a cirurgia ratos, expondo os cornos uterinos através laporatomy, injetando DNA para os ventrículos laterais do embrião em desenvolvimento, electroporating DNA para os progenitores que revestem a parede lateral, e cuidar de animais de pós- cirurgia. Nosso laboratório utiliza este protocolo para cirurgias em E15-E21 ratos, no entanto, é mais comumente realizada no E16 como mostra este vídeo.

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Inje o in uteroEletropora o IntraventricularMicroinje o de DNASistema de Eletropora oBiselagem de PipetaExposi o do Corno UterinoDirecionamento ao Ventr culo do Embri oCuidados P s operat rios do AnimalT cnica de Manipula o Gen tica

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