Indução e Monitoramento de hipersensibilidade do tipo retardada Ativa (DTH) em ratos

Resumo

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por CCR7 efetuador linfócitos T de memória. Aqui demonstramos como induzir DTH ativa em ratos Lewis e monitorar a resposta inflamatória.

Resumo

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por linfócitos efetores CCR7-T de memória que infiltram o local da injeção de um antígeno contra o qual o sistema imunológico tem sido preparado. A reação inflamatória é caracterizada por vermelhidão e inchaço do local de desafio antigênico. É um modelo conveniente para determinar a eficácia in vivo de imunossupressores. DTH cutânea pode ser induzida ou por transferência adotiva de linfócitos T antígeno-específicos ou por imunização ativa com um antígeno e subseqüente desafio intradérmico com o antígeno para induzir a reação inflamatória da pele em uma área determinada. Respostas DTH pode ser induzida a vários antígenos, por exemplo ovalbumina, tuberculina, toxóide tetânico, ou limpet keyhole hemocianina (KLH).

Aqui demonstramos como para induzir uma reação ativa DTH em ratos Lewis. Vamos primeiro preparar uma emulsão de água em óleo de KLH, nosso antígeno de interesse, em completa adjuvante de Freund e injetar este emulsão por via subcutânea a ratos. Isso vai preparar o sistema imunológico para desenvolver células de memória T direcionado para KLH. Sete dias mais tarde, vai desafiar os ratos por via intradérmica na parte traseira com KLH de um lado e com ovalbumina, um antígeno irrelevante, do outro lado. A reação inflamatória será visível 16-72 horas mais tarde, a área vermelha e inchada será medida como uma indicação da gravidade da DTH.

Protocolo

1. Preparação da emulsão

1. A emulsão é uma mistura 1:1 do antígeno (DTH pode ser induzida a vários antígenos: ovalbumina, toxóide tetânico, limpet keyhole hemocianina ....) em solução aquosa adicionado ao adjuvante completo de Freund. É muito importante adicionar o antígeno ao adjuvante e não o contrário!
   
   
2. Há uma grande quantidade de resíduos ao fazer e injetando uma emulsão, por isso sempre preparar 1,5 ou 2 vezes mais do que o que você precisa.
   
   
3. Dissolver antígeno em solução salina para preparar uma solução de 2 mg / ml. Não filtro, que você não quer perder os agregados!
   
   
4. Coloque completa adjuva....

Discussão

Para uma medição mais precisa da reação DTH recomendamos desafiando os ratos com o antígeno no pavilhão da orelha. A reação pode ser medido como uma diferença no ouvido inchaço entre o ouvido antígeno desafiou relevantes eo ouvido desafiados com solução salina, sozinho ou com o antígeno irrelevante. Uma demonstração do desafio no ouvido é mostrado na 1.

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Materiais