Este protocolo descreve um ensaio fatia organotípicas otimizado para o cérebro pós-natal e imagens de alta resolução de lapso de tempo de migração neuroblastos no fluxo migratório rostral.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Um Ensaio Slice organotípicas para High-Resolution Imaging Time Lapse de migração neuronal no cérebro pós-natal
Neste artigo
Resumo
Resumo
Neurogênese no cérebro pós-natal depende da manutenção de três eventos biológicos: a proliferação de células progenitoras, a migração dos neuroblastos, bem como diferenciação e integração de novos neurônios em circuitos neurais existentes. Para a neurogênese pós-natal no bulbo olfatório, esses eventos são segregados dentro de três domínios anatomicamente distintas: a proliferação em grande parte ocorre na zona subependimal (ZEE) dos ventrículos laterais, migrando neuroblastos atravessar o fluxo migratório rostral (RMS), e novos neurônios diferenciar e integração dentro do bulbo olfatório (OB). Os três domínios servem como plataformas ideais para estudar os mecanismos celulares, moleculares e fisiológicos que regulam cada um dos eventos biológicos distintamente. Este artigo descreve um ensaio fatia organotípicas otimizado para o tecido cerebral pós-natal, em que as condições extracelular imitam de perto as em ambiente vivo para a migração de neuroblastos. Nós mostramos que o nosso ensaio prevê movimento uniforme, orientado, e rápida de neuroblastos dentro da RMS. Este ensaio será muito adequado para o estudo da regulação celular autónomos e não-autônoma da migração neuronal utilizando cruz-transplante abordagens de ratos em diferentes backgrounds genéticos.
Protocolo
I. Procedimentos
As técnicas a seguir devem ser realizados em condições estéreis, em uma capela de fluxo laminar, utilizando ferramentas esterilizadas.
Preparação de pratos com fundo de vidro para fatias organotípicas
- Pratos devem ser preparados em ambiente estéril e usar ferramentas esterilizadas.
- A queda de 150μL de meio de fatia (veja receitas) é colocado no centro da peça com fundo de vidro do prato com cuidado para evitar bolhas de ar no meio.
- Com uma seringa descartável equipado com um 23 agulha, pontos múltiplos de cola (Borracha Cimento - cat Elmer, # E904) são colocados à m....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Migração neuronal na RMS é um componente essencial da neurogênese pós-natal no bulbo olfatório 1. Migração através do RMS ocorre em um plano tangente à superfície do cérebro. Neuroblastos tangencialmente migração são distintas das células migram radialmente com base na localização de sua fonte progenitor, bem como o destino divergentes de seus produtos finais neuronal 1, 2, 3. A população relativamente pura de células tangencialmente migrando na RMS pós-natal torna esta região anatômica definível u.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela North Carolina State University e da sua Faculdade de Medicina Veterinária. Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Agradecemos a Dan McWhorter para narrar o protocolo no vídeo. Este trabalho é suportado pelo NIH Grant 5R01NS062182, uma doação da Federação Americana de Investigação em Envelhecimento e fundos institucionais concedido a HTG.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Referências
- Ghashghaei, H. T., Lai, C., Anton, E. S. Neuronal migration in the adult brain: are we there yet. Nat. Rev. Neurosci. 8, 141-151 (2007).
- Valiente, M., Marin, O. Neuronal migration mechanisms in development and disease. Curr. Opin. Neurobiol. 20, 68-78 (2010).....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
