Artigo de método

Aplicação de Light-resina adesivo dental para Eletrodos de montagem ou Sondas microdiálise em Experimentos crônica

DOI:

10.3791/249

⸱

30 de julho de 2007

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1Laboratory for Behavior and Dynamic Cognition, Brain Science Institute, RIKEN, 2Laboratory for Biolinguistics, Brain Science Institute, RIKEN

Neste artigo

Resumo

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Neste relatório, propomos uma nova aplicação de luz de cura dental para as resinas base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise em experimentos crônica. Este material permite a ligação directa ao crânio.

Resumo

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Em experimentos de gravação crônica, auto-cura dental resinas acrílicas têm sido usados ​​como uma base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise-. Uma vez que estes não acrílicos vínculo até o osso, parafusos têm sido usados ​​como âncoras. No entanto, em pequenos animais experimentais como tentilhões ou mouse, seus crânios são muito frágeis e não podem realizar com sucesso as âncoras. Neste relatório, propomos uma nova aplicação de luz de cura dental para as resinas base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise em experimentos crônica. Este material permite a ligação directa ao crânio. Portanto, parafusos de âncora não são necessários e campo cirúrgico pode ser reduzido consideravelmente. Experiências passadas mostram que o efeito de ligação mantém mais de 2 meses. Janela de resina convencional de tempo, quando os materiais são maleáveis ​​e viável é de alguns minutos. No entanto, a janela do tempo de trabalho para estes adesivos dentais é significativamente mais larga e ajustável.

Protocolo

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Etapa 1. Preparação de implantação da sonda

  1. Anestesia (não mostrado no vídeo)

    Anestesiar cada ave com uma injeção de um interperitoneal ketamina (12,5 peso corporal mg / kg) ea mistura de xilazina (25 mg / kg) para produzir um nível constante de anestesia cirúrgica.

  2. Fix uma cabeça a um quadro estereotáxico

    Use Xylocaine (TM) de geléia para reduzir as dores locais de pressão bares orelha '. A cabeça de pássaro é fixado em um aparelho estereotáxico consistindo de barras de ouvido e um suporte de bico que mantém a cabeça em um ângulo de 45 °. Durante a cirurgia estereotáxica para implantação, aquecer o corpo de ave por pad cirúrgica com controle térmico (temperatura = 34 ~ 36 ° C).

  3. Desinfectar área cirúrgica

    Desinfectar o campo cirúrgico com isodine (TM) antes da cirurgia.

Etapa 2. Posicionamento estereotáxica

  1. Alinhamento ponto de referência

    Alinhar sonda dummy (vidro micropipeta) para o Lambda (Y-ponto) e marca Y-ponto com a pipeta dye-cheia. Restantes Dextran-TMR do estudo tracer última foi usado no vídeo.

  2. Incisão da pele

    Retire a pele e expor a superfície do crânio. Então, limpar a superfície do crânio com cotonetes.

  3. Posicionamento da cânula dummy (na direção horizontal)

    Mover a cânula dummy para o site de destino (AP eixo e coordenação Lateral)

  4. Craniotomia pequena e incisão da dura-máter.

    Use uma pinça fina para craniotomia e uma agulha de injeção fina (30 G) para incisões da dura-máter. Então, limpar a superfície do crânio.

  5. Posicionamento final (implantação) da cânula dummy

    Localize a ponta da cânula guia em 0,30 mm acima da sonda de microdiálise destina-região de destino. Por fim, limpar a superfície do crânio de novo, porque uma superfície limpa e seca é necessária para a ligação difícil.

Etapa 3. Pré-tratamento da superfície craniana

(O procedimento semelhante para "restauração direta enchimento" do produto dental deve ser empregada.)

  1. Tratamento primário
    1. Mix líquido PRIMAR A com B em um prato.
    2. Aplique a mistura sobre a superfície do crânio com uma pequena escova.
    3. Deixe descansar por 30 segundos.
    4. Seco com fluxo de ar suave. (Não lavar.)

  2. Aplicação do agente de união
    1. Aplicar o agente de união na superfície do crânio com uma pequena escova.
    2. Aplicar um fluxo de ar suave. (Não lavar.)
    3. Luz cura por 20 segundos.

Etapa 4. Montagem de resina composta

  1. Montagem de resina com plugger planície

    Se um plugger Plain não estiver disponível, uma espátula de micro-pode ser usado em seu lugar.

  2. Fotopolimerização
  3. Incremental de montagem

    Incremental de montagem é recomendada para garantir a reação completa da resina.

    Para a montagem incremental, aplicar agente de união antes de cada montagem.

  4. Moldar a resina composta e fotopolimerizador para endurecimento final.
  5. Final da cirurgia

Limpar a área cirúrgica, aplicar antibiótico (gentamicina pomada), e remover o animal da chama estereotáxica. Então, manter o animal em uma câmara de termo-controlada (temperatura = 33-35 ° C) para recuperação pós-anestésica.

Conforme mostrado no vídeo, nem qualquer comportamento anormal foi observado em nenhum dos animais no dia seguinte após a cirurgia.

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Discussão

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Em comparação com a aplicação de resinas acrílicas convencionais auto cura, a técnica introduzida tem várias vantagens importantes:

1. Ligação direta:
Acrílica auto-cura pode ser conectado ao osso por um tempo mas não adere ao osso. Portanto, os parafusos de fixação são necessários para corrigir uma base de montagem (ver Figura 2a). Em contraste, a resina de cura pela luz pode vínculo até o osso diretamente de modo parafusos não são necessários (Figura 2B). Portanto, o tamanho da base de montagem pode ser reduzido cons...

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Divulgações

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Experimentos foram realizados em conformidade com as orientações para a experimentação animal do cérebro Science Institute, RIKEN (RIKEN-BSI) e animal do instituto comitê de ética aprovado.

Agradecimentos

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Agradecemos aos nossos colegas em RIKEN-BSI para os seus apoios e conselhos gentilmente frutífera durante este trabalho. Eu gostaria de expressar minha sincera gratidão ao Professor Shigemi Mori, Professor G bor Juh sz, os drs. Kiyoji Matsuyama, Katalin AK kesi e rp d Dobolyi que me aconselhou a estudar o método de microdiálise durante o curso de pós-graduação na Universidade de Pós-Graduação de Estudos Avançados, Japão. Finalmente, agradecemos o Sr. Dr. Chris Sarnecky e Akitsugu Takasu para os seus apoios em gravação de vídeo.

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Materiais

1A fotografia mostra sonda de microdiálise (a), um tampão (b) e uma cânula guia (c). Nesta foto, a cânula guia é cercado por resina dental que adere ao crânio diretamente. Foto B mostra um pássaro durante a perfusão de drogas. No topo da cabeça, há uma sonda de microdiálise que é conectado a um tubo tefron bem. Barra de escala = 1 cm para A e 2 cm de B, respectivamente.

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Figura 1 - Fotografias de uma sonda de microdiálise (A) e um pássaro durante a perfusão de drogas (B)

Referências

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  1. Adell, A., Artigas, F. In vivo Brain microdialysis: Principles and applications. In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).
  2. Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. Microdialysis in the Neuroscience. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).
  3. Oakley, B., Schafer, R. Experimental Neurobiology: A laboratory Manual. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).
  4. Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study. Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).
  5. Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).
  6. Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).

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