O tronco cerebral de frango é composta por núcleos responsáveis pelo processamento de som binaural. A preparação única fatia coronal mantém o circuito inteiro, enquanto a abordagem culta fornece uma preparação única para estudar o desenvolvimento da estrutura neuronal e função auditiva em nível molecular, celular e rede.
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Artigo de método
Preparação e Cultura do Fatias de frango auditivo de tronco cerebral
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
O tronco cerebral frango é um sistema modelo bem estabelecido que tem sido amplamente utilizada para estudar a anatomia e fisiologia do processamento auditivo em períodos discretos de desenvolvimento 04/01, bem como os mecanismos de codificação temporal no sistema nervoso central 5-7.
Aqui apresentamos um método para preparar fatias de frango auditivo do tronco cerebral que pode ser usada para procedimentos experimentais aguda ou fatias organotípicas cultura de longo prazo manipulações experimentais.
O tronco cerebral é composto por frango angularis núcleo, azeitona, magnocellularis laminaris e superior. Esses núcleos são responsáveis pelo processamento de som binaural única e preparações corte coronal preservar o circuito inteiro. Em última análise, as culturas fatia organotípicas pode fornecer a oportunidade de manipular vários parâmetros de desenvolvimento, como atividade sináptica, expressão de componentes pré e pós-sináptica, expressão de aspectos excitabilidade controle e expressão gênica diferencial
Esta abordagem pode ser usada para ampliar o conhecimento geral sobre o desenvolvimento do circuito neural, refinamento e amadurecimento.
Protocolo
1. Preparação de Dissecting Área
- Continuamente bolha artificial de fluido cerebral espinhal (ACSF) com uma mistura de 95% O 2 / 5% CO 2 (pH entre 7,2-7,4, osmolaridade 295-310 mOsm / l).
- Enquanto ACSF está borbulhando, limpe a área de trabalho com EtOH 70%. Também limpar o vibratome e lâmina de corte. Enxaguar a lâmina com água destilada (dH 2 O).
- Local almofada de absorção de líquidos limpos em dissecar área com ferramentas adequadas de dissecação.
- Cola bloco de agar (40 mg de agarose / mL, ou seja 4%, em dH 2 O) para o palco de uma câmara de vibratome-slicing *.
* Dica: prepar....
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Discussão
Durante várias décadas, a preparação fatia aguda do tronco cerebral de frango tem sido utilizada para estudo do processamento auditivo 9, 10. Esta abordagem forneceu uma enorme quantidade de in-vitro dados fisiológicos sobre o processamento binaural de ambos os estados de desenvolvimento e maturidade 4, 11, 12. Muito se sabe sobre este circuito altamente especializados eo papel de cada núcleo desempenha no processamento temporal do som 13, 14. Na verdade, a curto prazo manipulaç.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Laboratório membros atuais e antigos Rubel.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| ACSF de frango | ||||
| NaCl | Fisher Scientific | M-11624 | 130 mM | |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | M-10576 | 26 mM | |
| KCl | Sigma-Aldrich | P-9333 | 3 mM | |
| NaH2PO4 | Sigma-Aldrich | S-8282 | 1.25 mM | |
| Glicose | Sigma-Aldrich | G-7528 | 10 mM | |
| MgCl2 | Fisher Scientific | M33-500 | 1 mM | |
| CaCl2 | Acros Organics | 423525000 | 2 mM | |
| Meio de cultura para frango (armazenar a 4°C) | ||||
| meio mínimo essencial avançado (com NEAA, piruvato de sódio a 110 mg/l, sem L-glutamato) | GIBCO, by Life Technologies | 12492-013 | 48,00% | |
| Solução salina balanceada de Earl’s | Sigma-Aldrich | E-2888 | 24,00% | |
| L-glutamina (200 mM) | Sigma-Aldrich | G-7513 | 1,00% | |
| Solução de glicose (200 g/l, filtrada esterilizante) | Sigma-Aldrich | G-7528 | 2,75% | |
| Soro de cavalo (inativado pelo calor, filtrado esterilizante) | Sigma-Aldrich | H-1138 | 24,00% | |
| Penicilina-estreptomicina* | Sigma-Aldrich | P-0781 | 1,00 ml * = Adicionar a 100 ml de meio de cultura, se necessário, para prevenir contaminação | |
| Equipamento específico | ||||
| Insertos de cultura celular Millicell-CM | PICMORG50 | EMD Millipore | ||
| Placa de 6 poços | Placa de cultura celular de 6 poços | Corning | ||
| Incubadora | Incubadora Forma Scientific com jaqueta de água e CO2 | Forma Scientific |
Referências
- Howard, M. A., Burger, R. M., Rubel, E. W. A developmental switch to GABAergic inhibition dependent on increases in Kv1-type K+ currents. J Neurosci. 27, 2112-2123 (2007).
- Kuba, H., Koyano, K., Ohmori, H. Development of m....
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Reimpressões e permissões
