transformação do dna plasmidial em e. coli usando o método de choque térmico

Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method

Transformação do DNA plasmidial em E. coli utilizando o método de choque térmico é uma técnica básica de biologia molecular. Ele consiste na inserção de um produto estrangeiro plasmídeo ou ligadura em bactérias. Este protocolo de vídeo descreve o método tradicional de transformação usando comercialmente disponíveis quimicamente bactérias competentes de Genlantis. Após uma curta incubação no gelo, uma mistura de bactérias quimicamente competentes e DNA é colocado a 42 ° C por 45 segundos (choque térmico) e depois colocados de volta no gelo. SOC media é adicionado e as células transformadas são incubados a 37 ° C por 30 min com agitação. Para ter certeza de isolar as colônias, independentemente da eficiência de transformação, duas quantidades de bactérias transformadas são banhados. Este protocolo tradicional pode ser utilizado com sucesso para transformar a maioria disponível comercialmente bactérias competentes. O turbocells de Genlantis também pode ser usado em um protocolo de transformação romance de 3 minutos, descrito no manual de instruções.

Transformação do DNA plasmidial em E. coli Usando o método de choque térmico

A transformação de DNA plasmidial em E. coli utilizando o método de choque térmico é uma técnica básica de biologia molecular. Consiste na inserção de um...

Olá, eu sou Alex Hoge. Trabalho no laboratório do professor Hall no Departamento de Fisiologia e Biofísica da Universidade da Califórnia em Irvine. E hoje vou mostrar como transformar E. coli eletricamente competente pelo método de choque elétrico.Hoje estou usando esta técnica para transformar um coli com meu produto de ligation porque estou fazendo um prob para realizar uma imunomarcação em montagem inteira em peixe-zebra. Ok, então vamos começar a fazer a transformação. Primeiro, você precisa ter seu banho-maria ou bloco seco a 42 graus.Você precisa manter suas bactérias, recém-retiradas do estoque principal, em gelo. Hoje utilizamos células eletrocompetentes mantidas em gelo, bem como seu DNA em gelo. Além disso, você precisa de um tubo com meio SOC em temperatura ambiente ou a 37 °C e suas placas com meio LB mais antibiótico.Agora vou adicionar o DNA às bactérias. Trabalho próximo à chama para não contaminar as bactérias. Adiciono então a ligation às bactérias.São 50 microlitros de bactérias e, em seguida, imediatamente de volta ao gelo; você pode agitar levemente para misturar as bactérias com o seu DNA e deixar na geladeira por até 15 minutos. Agora, passaram-se 15 minutos e

Transformação do DNA plasmidial em E. coli Usando o método de choque térmico

Neste artigo

Resumo

Reimpressões e permissões

Etiquetas