Avaliar Propriedades Sinalização de Ectodérmica Epitélio Durante o Desenvolvimento Craniofacial

Summary

Este artigo descreve uma técnica de transplante de tecido que foi projetado para testar a sinalização e padronização das propriedades ectoderma de superfície cefálica durante o desenvolvimento craniofacial.

Abstract

A acessibilidade dos embriões aviária ajudou embriologistas experimental entender o destino das células durante o desenvolvimento eo papel das interações tecido que regulam padronização e morfogênese de vertebrados (eg, ^{1, 2, 3, 4).} Aqui, nós ilustrar um método que explora essa acessibilidade para testar a sinalização e as propriedades padrões dos tecidos durante o desenvolvimento ectodérmico facial. Nesses experimentos, nós criamos codornas-chick ⁵ ou ⁶ do mouse grão-de-quimeras transplantando o ectoderma cefálica que cobre a mandíbula superior de codorniz ou o mouse para qualquer região do mesmo ou uma região ectópica de embriões de galinha. O uso de codorna como tecido do doador para o transplante em pintos foi desenvolvido para tirar vantagem de um marcador nucleolar presente em codornas mas não células de bico, permitindo assim que os pesquisadores a distinguir host e tecidos de doadores ^7. Da mesma forma, um elemento repetitivo está presente no genoma do rato e é expressa ubiquitously, que nos permite distinguir host e tecidos de doadores em grão-de-rato quimeras ^8. O uso de ectoderma mouse como tecido do doador será extremamente estender nossa compreensão dessas interações tecido, porque isso irá permitir-nos testar as propriedades de sinalização do ectoderma derivado de vários embriões mutantes.

Protocol

1. Preparar o tecido do doador

1. Prepare meios de cultura, sharpen pinos de vidro, afiar agulhas de tungstênio.
2. Coletar embriões a partir de casca, lavar em PBS gelado.
   1. Usando uma seringa de 10 ml e uma agulha de calibre 18 remover 1,0 mL de albumina da extremidade pontiaguda da casca do ovo.
   2. Faça um pequeno furo na parte superior do escudo usando o ponto de tesouras, e depois cortar uma abertura circular para expor o embrião
3. Retire a cabeça e coloque em DMEM (soro livre, temperatura ambiente)
4. Dissecar processo frontonasal do embrião (ou o site de outros doadores, como processo maxilar....

Discussion

Usando este método de transplante nos permitiu determinar que o ectoderma contém informações de sinalização que regula a polaridade dorsoventral e extensão proximodistal do maxilar superior. A similaridade de resultados quando se utiliza codorniz ou ectoderma mouse, ea conservação dos sinais moleculares neste tecido entre muitas espécies ^6,11 indica que este é um centro altamente conservada entre os vertebrados de sinalização. Além disso, outros pesquisadores usaram técnicas semelhantes para testar as proprie.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Tektronix, Inc.
DMEM	Universidade da Califórnia - São Francisco	CCFDA003
BSA	Sigma-Aldrich	A7906
Dispase	GIBCO, por Life Technologies	17105-041
Placa de Petri de 35x10 mm	Falcon BD	1008
No. 5 Pinça Dumont	Ferramentas de Belas Ciências	11252-20
Tesoura	Fine Science Tools	14058-11
Tesoura de mola	Fine Science Tools	15010-11
Porta-agulhas	Fine Science Tools	26016-12
Agulha de tungstênio	Fine Science Tools	26000
Tubo microcapilar	Drummond Scientific	3-000-225-G
Pasteur Pipets	Fisher Scientific	13-678-6B
Tesoura de mola	Fine Science Tools	15010-11
Suporte de lâmina	Fine Science Tools	10052-11
Lâmina de barbear	Fine Science Tools	10050-00