Coletas de sangue são necessários em um grande número de estudos, por exemplo, para estudar o perfil farmacocinético de um composto. Aqui, nós demonstrar como tirar sangue de ratos, utilizando duas técnicas: tirar sangue da veia safena ou por punção cardíaca.
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Artigo de método
Desenho de sangue de ratos através da veia safena e por punção cardíaca
Neste artigo
Resumo
Resumo
A retirada de sangue de roedores é necessário para um grande número de ambos in vitro e in vivo. Sites de sangue desenha são numerosos em roedores: coração retro-orbital do seio, veia jugular, veia maxilar, veia safena,. Cada técnica tem suas vantagens e desvantagens, e alguns não estão aprovados mais em alguns países (por exemplo, retro-orbital desenha na Holanda). Uma discussão sobre diferentes técnicas de desenho são de sangue 03/01 disponível. Aqui, apresentamos duas técnicas para a retirada de sangue de ratos, cada um com suas aplicações específicas.
Tirar sangue da veia safena, desde que seja feito corretamente, induz sofrimento mínima em animais e não requer anestesia. Esta técnica permite que chama repetidas de pequenas quantidades de sangue, tais como necessários para estudos farmacocinéticos 4,5, determinando plasma química, ou contagem de sangue 6.
Punção cardíaca permite a coleta de grandes quantidades de sangue de um único animal (até 10 ml de sangue pode ser extraída de um rato g 150). Esta técnica é, portanto, muito útil como um procedimento terminal, quando a retirada de sangue da safena não iria fornecer uma amostra suficientemente grande. Usamos punção cardíaca, quando precisamos de uma quantidade suficiente de soro de uma cepa específica de ratos para crescer linhas de linfócitos T in vitro 4-9.
Protocolo
Desenho de sangue de ratos através da veia safena e por punção cardíaca
Nota: Todos os procedimentos devem ser aprovados pelo seu cuidado instituto animal e comissão de uso.
1. Tirar sangue da veia safena
- Este procedimento é realizado sem anestesia e requer duas pessoas, uma que lida com o rato, e aquele que realiza o sorteio.
- Faça um cone de uma toalha ou mantenha o rato com luvas de manipulação de roedores, deixando um membro posterior exposta.
- Raspar a parte de trás da perna com um aparador elétrico até a veia safena é visível. Raspar uma área grande o suficiente, de modo que nenhum cabelo vai entrar em contato com o local da punção. Use uma pequena quantidade de não-perfumada loção de mão para manter o cabelo não-raspado de distância do local da punção.
- Faça um ponto de compressão na base da perna para fazer o bojo para fora da veia safena (semelhante ao uso de um torniquete, quando a retirada de sangue de um humano ou um animal de grande porte). Puncionar a veia com uma agulha de 20G e colher o sangue que ela sai com um microvette. Bombeamento com a perna vai ajudar a tirar mais sangue. Quando você tiver coletado sangue suficiente, mantenha uma compressa limpa no local da punção para parar o sangramento.
2. Coleta de sangue por punção cardíaca
- Este procedimento requer anestesia e é terminal. Animais devem ser imediatamente sacrificados no final de uma punção cardíaca.
- Prepare uma seringa de 5 ml com uma agulha 23G1.
- Profundamente anesthesize o rato e verificar para anestesia por falta de movimento espontâneo, a taxa de respiração lenta e falta de resposta a estímulos (como beliscar um dedo do pé). Para garantir a anestesia prolongada, coloque uma seringa contendo uma toalha de papel embebido em anestésico volátil no nariz do rato durante o procedimento.
- Coloque o rato sobre as suas costas, de frente para longe de você.
- Se você é destro, coloque o dedo indicador esquerdo ao nível das costelas inferiores, sem aplicar qualquer pressão. O coração estará localizado ~ 1 cm acima desse ponto, um pouco à direita.
- Segurando a seringa em um ângulo de 45 graus, insira a agulha entre duas costelas e assistir a uma gota de sangue para entrar na agulha. Esta é uma indicação que você está no coração. Sem mover a sua seringa, puxar o êmbolo para encher a seringa. Uma vez que a seringa está cheia, cuidadosamente desconecte-o da agulha e esvaziá-lo em um tubo. A seringa pode ser re-inscritos para a agulha para o desenho mais sangue. Deve ser possível tirar 5-10 ml de sangue de um rato g 120-180.
- Imediatamente euthanize o rato.
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Discussão
Tirar sangue da veia safena é uma maneira conveniente de obter pequenas quantidades de sangue sem anestesia. Se a amostragem repetida é necessária, as regulamentações para garantir que você não tirar muito sangue de um rato.
A retirada de sangue por punção cardíaca é uma maneira conveniente de obter grandes quantidades de sangue, mas este é um procedimento terminal. O animal deve ser sacrificado no final da coleta de sangue.
Estas técnicas (como todas as técnicas em animais vivos) deve ser o primeiro feito na presença de um ...
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Agulha 20G 1/2 | Ferramenta | BD Biosciences | 305176 | Para punção da veia safena |
| Microvette 300 | Ferramenta | Sarstedt Ltd | 20.1308.100 | Para coletar sangue da veia safena |
| Aparador elétrico | Ferramenta | Braintree Scientific, Inc. | CLP-32130 | |
| Agulha 23 G 1 | Ferramenta | BD Biosciences | 305145 | Para punção cardíaca |
| Seringa plástica de 5 ml, ponta lisa | Ferramenta | Fisher Scientific | 14-826-12 | Para punção cardíaca |
Referências
- Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
- Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
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Reimpressões e permissões
