Um dispositivo micro com padrões Groove para estudar o comportamento celular

A. Microfabricação do dispositivo micro

1. De 4 polegadas wafer Si é tratada com plasma de oxigênio reativo (5 min a 30W, Harrick Científico, NY).
2. Fotorresiste negativo (SU-8 2015, Microchem, MA) é spin-revestido a 900 rpm por 1 min em um wafer de silício.
3. O wafer é mole cozido a 95 ° C por 6 min numa placa de aquecimento e é exposto à luz UV (200W) por 4 min através de um filme de máscara contendo microcanais.
4. O wafer é pós cozido a 95 ° C por 6 min e é desenvolvido usando SU-8 desenvolvedor fotorresiste.
5. O wafer fotorresiste padronizada contendo microcanais é colocado em um prato de Petri.
6. Moldes de poli (dimetilsiloxano) (PDMS) (Sylgard 184) são fabricados pela mistura de elastômero de silicone e um agente de cura (10:1).
7. A mistura PDMS é derramado no molde mestre Si e é colocado em um dessecador a vácuo para remover as bolhas.
8. PDMS é curado a 70 ° C por 1 ~ 2 horas.
9. Moldes PDMS são, então, tirou do molde mestre Si.

B. Montagem do dispositivo

1. 40 mm de espessura superior canais fluídicos e 40 mM canais de fundo grosso microgrooved (25, 50, 75 e 100 μ m de largura) são obtidos a partir de dois moldes diferentes mestre Si.
2. Canal de entrada e saída do dispositivo fluídico são perfurados.
3. Canais fluídicos e Micro-canais estão irreversivelmente ligados pelo plasma reativas de oxigênio (5 min de 30W, Harrick Científico, NY).
4. Matriz extracelular (ECM) (ie fibronectina) é revestido no interior do dispositivo microfluídicos para uma hora em estufa (37 ° C).

C. semeadura Celular e montagem experimental

1. Fibroblastos NIH-3T3 mouse são cultivadas em um frasco de cultura de tecidos utilizando o Media Modified Dulbecco Águia (DMEM) contendo 10% de soro fetal bovino (FBS).
2. Células são tripsinizados e dissociado.
3. Células dissociadas são carregados para os canais de Prêmios Prêmios na densidade das células de 3 x 10 ⁶ células / ml (Figura 1).
   
   
   Figura 1
   
   
4. 2 mL de mídia, 100 mM H ₂ O _2, e ensaio de apoptose (20 mL anexina V e iodeto de propídio 40 mL, Invitrogen, CA) são infundidos em um canal usando uma bomba de seringa (1 ml / min).
5. Células são monitorados em tempo real, usando um microscópio invertido (Nikon TE 2000).

Cells were immobilized and patterned within microgrooved substrates in a microfluidic device. The apoptosis process of cells exposed to hydrogen peroxide was observed in real-time and analyzed by using Annexin V and propidium iodide. Thus, this microfluidic device containing microgroove channels could be useful for high-throughput drug screening.