Demonstramos a metalation, purificação e caracterização de complexos de lantanídeos. Os complexos descrito aqui pode ser conjugado com macromoléculas para habilitar o rastreamento destas moléculas usando ressonância magnética.
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Artigo de método
Purificação de preparação, e Caracterização de Complexos de lantanídeos para uso como agentes de contraste para Imagem por Ressonância Magnética
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Polyaminopolycarboxylate baseado ligantes são comumente usados para quelar íons lantanídeos, e os complexos resultantes são úteis como agentes de contraste para ressonância magnética (MRI). Muitos ligantes disponíveis comercialmente são especialmente úteis porque contêm grupos funcionais que permitem rápido, de alta pureza e alto rendimento conjugação de macromoléculas e biomoléculas através de amina-reativo ésteres ativados e grupos isotiocianato ou tiol-reativa Maleimidas. Enquanto metalation desses ligantes é considerada o conhecimento comum no campo da química bioconjugation, diferenças sutis em procedimentos metalation devem ser levados em consideração na seleção de materiais metálicos de partida. Além disso, várias opções para a purificação e caracterização de existir, e seleção do procedimento mais eficaz depende em parte da seleção de matérias-primas. Essas diferenças sutis são muitas vezes negligenciados nos protocolos publicados. Aqui, nosso objetivo é demonstrar os métodos comuns para metalation, purificação e caracterização de complexos de lantanídeos que podem ser usados como agentes de contraste para ressonância magnética (Figura 1). Esperamos que esta publicação irá permitir que os cientistas biomédicos para incorporar as reações de complexação lantanídeos em seu repertório de reações comumente utilizados, facilitando a seleção de matérias-primas e métodos de purificação.
Protocolo
1. Metalation usando LnCl três sais
- Dissolver o ligante na água para produzir uma solução de 30-265 mM. O ligante 2 - (4-isothiocyanatobenzyl)-ácido dietileno pentaacetic (p-SCN Bn-DTPA) foi usado neste vídeo a uma concentração de 73 mM.
- Ajustar o pH da solução do ligante para entre 5,5 e 7,0 pela adição de 1 M NH 4 OH. Neste vídeo, 0,2 mL de NH M 1 4 OH solução foi usado.
- Dissolver 02/01 equivalentes de LnCl 3 em água para produzir uma solução com uma concentração de 5000-1000 mM. Neste vídeo, EuCl 3 e GdCl 3 foram usados em concentrações de 111 mM. Um excesso....
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Discussão
Dado o número crescente de publicações que incluem agentes de contraste à base de lantanídeos 14/04, é importante que seja tomado cuidado na preparação, purificação e caracterização de produtos para garantir resultados reprodutíveis e comparáveis. Estes complexos são muitas vezes considerados desafiadores para purificar e caracterizar moléculas orgânicas em relação ao devido à sua natureza paramagnética ea sensibilidade de qualquer grupo funcional que pode ser usado para bioconjugation. Nós descrevemos método.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Agradecemos fundos de inicialização de Wayne State University (MJA), uma bolsa da Fundação Americana para Aging Research (SMV), e um Caminho para a Independência Award Transição de Carreira (R00EB007129) do Instituto Nacional de Imagem Biomédica e Bioengenharia do Instituto Nacional da Saúde (MJA).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Reagentes e Equipamentos | Companhia | Número de catálogo | |
| EuCl 3 • 6H 2 O | Sigma-Aldrich | 203254-5G | |
| p SCN-Bn-DTPA | Macrocyclics | B-305 | |
| hidróxido de amônio | EMD | AX1303-3 | |
| Spectra / Por Biotech Celulose Ester (CE) Membrana de Diálise - 500 D MWCO | Fisher Scientific | 68-671-24 | |
| Millipore IC Millex-LG Unidades Filtro | Fisher Scientific | SLLG C13 NL | |
| xilenol laranja tetrasodium sal | Alfa Aesar | 41379 | |
| ácido acético | Fluka | 49199 | |
| D 2 O | Cambridge Isotope Laboratories, Inc. | DLM-4-25 | |
| depurador de água | ELGA | PURELAB Ultra | |
| cromatografia líquida de alta eficiência e espectrometria de massas | Shimadzu | LCMS-2010EV | |
| analisador de tempo de relaxamento | Bruker | mq60 minispec | |
| Espectrofotômetro UV-vis | Fisher Scientific | 20-624-00092 | |
| liofilizador | Fisher Scientific | 10-030-133 | |
| medidor de pH | Hanna Instruments | HI 221 | |
| espectrofluorímetro | HORIBA Jobin Yvon | Fluoromax-4 | |
| Versão Calculadora Peso Molecular 6,46 por Matthew Monroe, baixado 17 out, 2009 | http://ncrr.pnl.gov/software/ | Calculadora de Peso Molecular |
Referências
- Barge, A., Cravotto, G., Gianolio, E., Fedeli, F. How to determine free Gd and free ligand in solution of Gd chelates. A technical note. Contrast Med. Mol. Imaging. 1, 184-188 (2006).
- Nagaraja, T. N., Croxen, R. L., Panda, S., Knight, R. A., Keenan, K. A., Brown, S. L., Fenstermacher, J. D., Ewing, J. R.
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Reimpressões e permissões
