Purificação de preparação, e Caracterização de Complexos de lantanídeos para uso como agentes de contraste para Imagem por Ressonância Magnética

Summary

Demonstramos a metalation, purificação e caracterização de complexos de lantanídeos. Os complexos descrito aqui pode ser conjugado com macromoléculas para habilitar o rastreamento destas moléculas usando ressonância magnética.

Abstract

Polyaminopolycarboxylate baseado ligantes são comumente usados ​​para quelar íons lantanídeos, e os complexos resultantes são úteis como agentes de contraste para ressonância magnética (MRI). Muitos ligantes disponíveis comercialmente são especialmente úteis porque contêm grupos funcionais que permitem rápido, de alta pureza e alto rendimento conjugação de macromoléculas e biomoléculas através de amina-reativo ésteres ativados e grupos isotiocianato ou tiol-reativa Maleimidas. Enquanto metalation desses ligantes é considerada o conhecimento comum no campo da química bioconjugation, diferenças sutis em procedimentos metalation devem ser levados em consideração na seleção de materiais metálicos de partida. Além disso, várias opções para a purificação e caracterização de existir, e seleção do procedimento mais eficaz depende em parte da seleção de matérias-primas. Essas diferenças sutis são muitas vezes negligenciados nos protocolos publicados. Aqui, nosso objetivo é demonstrar os métodos comuns para metalation, purificação e caracterização de complexos de lantanídeos que podem ser usados ​​como agentes de contraste para ressonância magnética (Figura 1). Esperamos que esta publicação irá permitir que os cientistas biomédicos para incorporar as reações de complexação lantanídeos em seu repertório de reações comumente utilizados, facilitando a seleção de matérias-primas e métodos de purificação.

Protocol

1. Metalation usando LnCl _três sais

1. Dissolver o ligante na água para produzir uma solução de 30-265 mM. O ligante 2 - (4-isothiocyanatobenzyl)-ácido dietileno pentaacetic (p-SCN Bn-DTPA) foi usado neste vídeo a uma concentração de 73 mM.
2. Ajustar o pH da solução do ligante para entre 5,5 e 7,0 pela adição de 1 M NH ₄ OH. Neste vídeo, 0,2 mL de NH M 1 ₄ OH solução foi usado.
3. Dissolver 02/01 equivalentes de LnCl ₃ em água para produzir uma solução com uma concentração de 5000-1000 mM. Neste vídeo, EuCl ₃ e GdCl ₃ foram usados ​​em concentrações de 111 mM. Um excesso....

Discussion

Dado o número crescente de publicações que incluem agentes de contraste à base de lantanídeos ^14/04, é importante que seja tomado cuidado na preparação, purificação e caracterização de produtos para garantir resultados reprodutíveis e comparáveis. Estes complexos são muitas vezes considerados desafiadores para purificar e caracterizar moléculas orgânicas em relação ao devido à sua natureza paramagnética ea sensibilidade de qualquer grupo funcional que pode ser usado para bioconjugation. Nós descrevemos método.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagentes e Equipamentos	Companhia	Número de catálogo
EuCl 3 • 6H 2 O	Sigma-Aldrich	203254-5G
p SCN-Bn-DTPA	Macrocyclics	B-305
hidróxido de amônio	EMD	AX1303-3
Spectra / Por Biotech Celulose Ester (CE) Membrana de Diálise - 500 D MWCO	Fisher Scientific	68-671-24
Millipore IC Millex-LG Unidades Filtro	Fisher Scientific	SLLG C13 NL
xilenol laranja tetrasodium sal	Alfa Aesar	41379
ácido acético	Fluka	49199
D 2 O	Cambridge Isotope Laboratories, Inc.	DLM-4-25
depurador de água	ELGA	PURELAB Ultra
cromatografia líquida de alta eficiência e espectrometria de massas	Shimadzu	LCMS-2010EV
analisador de tempo de relaxamento	Bruker	mq60 minispec
Espectrofotômetro UV-vis	Fisher Scientific	20-624-00092
liofilizador	Fisher Scientific	10-030-133
medidor de pH	Hanna Instruments	HI 221
espectrofluorímetro	HORIBA Jobin Yvon	Fluoromax-4
Versão Calculadora Peso Molecular 6,46 por Matthew Monroe, baixado 17 out, 2009	http://ncrr.pnl.gov/software/	Calculadora de Peso Molecular