Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Análise da pegada
- Configurar a pista (Figura 1A)
- Corte um pedaço de papel branco (29,7 cm x 42 cm x 0,09 mm) longitudinalmente em três comprimentos de igual largura. Coloque um pedaço de papel branco (9,9 cm x 42 cm) sobre a mesa.
- Coloque a caixa escura do gol na extremidade distal do papel. Coloque outras caixas (aproximadamente do mesmo comprimento do papel) com as paredes em ambos os lados da pista, evitando a fuga de ratos.
- Coloque tinta preta e tinta vermelha em placas de Petri separadas (35 mm de diâmetro).
2. Sessão de Treino
NOTA: Realize a sessão de treinamento apenas às 4 semanas de idade.
- Coloque um mouse na extremidade proximal do papel (vire a cabeça em direção à caixa do gol). Deixe o rato andar da extremidade proximal até a caixa do gol. Remova o mouse da caixa de gol. Se o mouse parar no papel, empurre-o suavemente para a caixa de gol com o dedo.
- Segure o mouse segurando a nuca entre o polegar e o indicador para limitar o movimento dos membros anteriores. Em seguida, segure as costas e a cauda entre a ponta do polegar e os outros dedos para limitar o movimento dos membros posteriores.
nota: Segurar o mouse insuficiente resulta em manchas de tinta na roupa.
- Mergulhe a parte inferior dos membros anteriores em tinta vermelha e a parte inferior dos membros posteriores em tinta preta. Coloque imediatamente o mouse na extremidade proximal do papel (vire a cabeça em direção à caixa do gol). Deixe o rato andar da extremidade proximal até a caixa do gol. Se o mouse parar no papel, empurre-o suavemente para a caixa de gol com o dedo.
- Remova o mouse da caixa de gol. Vá para a sessão de teste.
3. Sessão de teste
- Após a sessão de treinamento, configure a pista para pegadas com um novo pedaço de papel branco cortado.
- Segure o mouse segurando a nuca entre o polegar e o indicador para limitar o movimento dos membros anteriores. Em seguida, segure as costas e a cauda entre a bola do polegar e os outros dedos para limitar o movimento dos membros posteriores.
- Mergulhe a parte inferior dos membros anteriores em tinta vermelha e a parte inferior dos membros posteriores em tinta preta. Coloque imediatamente o mouse na extremidade proximal do papel. Deixe o rato caminhar da extremidade proximal até a caixa do gol.
NOTA: Como os ratos preferem o escuro, a caminhada se torna mais estável à medida que o mouse se aproxima da caixa de gol escura. Se o mouse parar no papel, empurre-o suavemente para a caixa de gol com o dedo. Em seguida, se pegadas confiáveis não forem obtidas para análise porque o mouse parou, tente novamente a sessão de teste.
- Retorne o mouse para a gaiola inicial da caixa do gol. Limpe a caixa da meta com etanol 70% após cada sessão de teste. Seque ao ar o papel impresso com pé.
4. Análise de pegadas
- Obtenha três medidas de cada parâmetro (comprimentos da passada dos membros anteriores e posteriores, larguras da base anterior e posterior, sobreposição entre os membros anteriores e posteriores, Figura 1B) com uma régua de papel impresso.
nota: Como as pegadas das extremidades proximal e distal freqüentemente mostram grandes variações devido à parada ou corrida, escolha a parte com um padrão de marcha constante de pegadas. A parte do meio do papel impresso em pé geralmente será adequada para a análise.
- Para o comprimento da passada, meça as distâncias entre as mesmas partes da pata (por exemplo, almofada da pata ou dedo do pé).
- Para a largura da base frontal, desenhe uma linha entre as pegadas frontais consecutivas à direita (ou à esquerda). Em seguida, meça o comprimento da linha vertical do bloco da pegada frontal esquerda (ou direita) até a linha desenhada entre as pegadas direita (ou esquerda).
- Para a largura da base traseira, desenhe uma linha entre as pegadas traseiras direitas (ou esquerdas) consecutivas. Em seguida, meça o comprimento da linha vertical da almofada da pegada traseira esquerda (ou direita) até a linha traçada entre as pegadas direita (ou esquerda).
- Para sobreposição, meça a distância entre as almofadas das pegadas dianteiras e traseiras esquerdas (ou direitas).
- Faça a média das três medidas para cada indivíduo. Use a média individual de cada parâmetro para a análise estatística.
- Para o comprimento da passada, use a média das médias individuais das passadas esquerda e direita.
- Para assimetria do comprimento da passada, use o valor absoluto da diferença entre as médias individuais do comprimento da passada do membro esquerdo e do membro direito.
- Para a análise estatística dos outros parâmetros (largura da base frontal, largura da base traseira e sobreposição), use a média individual diretamente.
