O labirinto aquático com realocação de plataforma: um método para avaliar a memória de trabalho

Resumo

Fonte: Hausser, N., et al. Detectando déficits comportamentais em ratos após lesão cerebral traumática.J. Vis. Exp (2018).

Neste vídeo, descrevemos o teste do labirinto aquático de Morris com realocação de plataforma, uma tarefa de navegação usada para estudar a memória de trabalho em roedores.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Labirinto de Água com Memória de Trabalho

1. equipamento
   1. Utilizar um reservatório cheio de água até uma altura de 28 cm e mantido a 26 ± 1 °C.
   2. Use uma plataforma de vidro acrílico transparente com 10 cm de diâmetro em um suporte de 26 cm de altura.
      nota: A superfície superior da plataforma deve ser revestida com silicone na forma de um círculo com um X atravessado. Isso permite que os ratos subam na plataforma e lhes dá tração para que não escorreguem.
   3. Reúna um cronômetro, uma lâmpada de calor, toalhas descartáveis, almofadas absorventes, gaiolas extras e uma pequena rede de peixes de aquário de cabo longo. Use um sistema de rastreamento de vídeo computadorizado conectado a uma câmera de vídeo para gravar a natação do rato e enviar os dados para o computador. Salve o vídeo e os dados no computador para análise posterior.
2. Teste de labirinto de água com memória de trabalho
   1. Dê aos ratos quatro pares de tentativas por dia durante cinco dias consecutivos, coloque a plataforma em cada um dos quatro quadrantes e inicie os ratos a partir de cada um dos quatro pontos de partida (N, S, E, W) conforme descrito abaixo.
   2. Primeiro, defina os pares de local-plataforma inicial a serem usados ao longo do experimento.
      NOTA: A ordem dos quadrantes onde a plataforma está localizada e o ponto de partida utilizado precisam estar em uma ordem diferente para cada um dos cinco dias de natação, mas a mesma para cada rato.
      1. Use quatro pontos de partida (N, S, E ou W) e quatro locais de plataforma (Quadrantes 1, 2, 3 ou 4; Figura 1). Por exemplo, (N, 2; E, 4; S, 1; W, 3; veja a Figura 1). Planeje uma ordem equilibrada (não aleatória) para evitar pontos de partida muito próximos das plataformas (nenhum ponto de partida é o mesmo quadrante que a localização da plataforma). Configure uma planilha de dados usando os quadrantes da plataforma e quatro pontos de partida.
      2. Escreva um protocolo para o software de rastreamento de vídeo usar para filmar os ratos nadando e coletar dados especificados (por exemplo, duração da natação, velocidade, distância percorrida antes de encontrar a plataforma).
         nota: O software de rastreamento interromperá automaticamente a gravação após a duração especificada. O protocolo deve permitir especificar onde a plataforma é colocada, quantos testes serão executados por animal e quantos animais serão testados por sessão, e também a duração máxima permitida (por exemplo, 120 s).
      3. Teste de 4 a 6 ratos por sessão.
         nota: Mais de 6 ratos criam um problema no tempo entre os ratos e podem levar a erros por parte do manipulador. As caixas de aquecimento também ficam lotadas.
   3. Julgamento 1
      1. Abra o software de rastreamento de vídeo e carregue o protocolo correto, incluindo o mapa do labirinto aquático.
      2. Coloque a plataforma no local designado (por exemplo, 2; Figura 1) e verifique se ele corresponde ao mapa no software. Prepare o software de rastreamento para iniciar quando o rato entrar no campo de visão da câmera de vídeo.
      3. Coloque o rato no tanque de frente para a parede no local designado (por exemplo, N; Figura 1) e inicie imediatamente o cronômetro.
      4. Permita que o rato encontre a plataforma. Quando o rato encontrar a plataforma, pare o cronômetro e registre o tempo na planilha. Se o rato não conseguir encontrar a plataforma, leve-o até a plataforma manualmente e registre 120 s. Deixe o rato 15 s permanecer na plataforma.
   4. Julgamento 2
      1. Verifique se o software está pronto para a versão de avaliação 2. Coloque o rato de volta no tanque na mesma posição inicial (N). Repita a etapa 1.2.3.4.
   5. Após o Teste 2, coloque o rato no recinto aquecido por 4 min. Mova a plataforma para o segundo local (4; Figura 1) e verifique se ele corresponde ao mapa no software.
   6. Repita os procedimentos do Teste 1 e 2 (etapas 1.2.3 a 1.2.4) até que todos os quatro pares de local inicial/plataforma sejam concluídos.

Resultados

Figura 1. Diagrama do labirinto aquático.Este diagrama demonstra as possíveis localizações da plataforma (1, 2, 3, 4) e pontos de partida (N, S, E, W) para o labirinto aquático de Morris com memória de trabalho. Os ratos podem fazer dois testes de cada par de local / plataforma inicial. Há um intervalo entre tentativas de 15 s e 4 minutos de descanso em uma câmara de aquecimento entre...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Ratos Sprague-Dawley	Laboratórios Charles Rivers	CD-IGS ratos, código de estirpe 001	Macho albino 300-350g na chegada
Piscina de fibra de vidro	Fabricante desconhecido		72" de diâmetro x 30" de profundidade (~ 500 galões)
Plataforma de plexiglass	Feito à mão por Maggie Parsley		10 cm de diâmetro 26" de altura com silicone aplicado na superfície da plataforma para fornecer uma superfície de aderência
Caixas de animais de plexiglass com tampas	Oficina de máquinas UTMB		2 caixas 10" w x 16" l x 9" h
Luzes pontuais/lâmpadas de calor	Depósito doméstico		3 ao redor da piscina 2 sobre caixas para secar animais
AnyMaze	Instrumentos de San Diego	9001	http://www.sandiegoinstruments.com/any-maze-video-tracking/