Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Cirurgia de Implante de Cabeceira
NOTA: Certifique-se do uso de instrumentos estéreis e providencie a cirurgia e a recuperação em diferentes zonas. Uma vez dominado, o procedimento de implantação dura cerca de 30 min.
- Para analgesia, 30 min antes do início da cirurgia, injetar buprenorfina (0,05 mg/kg) por via subcutânea e colocar o animal de volta em sua gaiola de origem.
nota: Os efeitos analgésicos da buprenorfina duram aproximadamente 12 h, muito depois do término do procedimento. Em nossa experiência, os camundongos não apresentam sinais de sofrimento relacionados a esta intervenção, mas uma dose subsequente de 0,05 mg/kg de buprenorfina é recomendada 24h após a cirurgia.
- Anestesiar o animal em uma câmara com gás isoflurano a 2,5% a 3%. Aguarde 3 min e verifique se o mouse está devidamente anestesiado, observando a respiração e a falta de movimento dentro da câmara. Passe o mouse para um cone de nariz em uma mesa cirúrgica com uma almofada de aquecimento e, por pinçamento interdigital, verifique se não há reflexo de retirada e abaixe o isoflurano para 1,5%.
- Raspe a cabeça do mouse usando um barbeador elétrico. Para obter um ambiente estéril, esfregue a área raspada com solução de iodo e depois com álcool 70%. Repita este procedimento mais duas vezes.
- Injete cloridrato de lidocaína (2%, 2 mg/kg) sob a pele da cabeça para anestesia local e aguarde 5 minutos para que os efeitos comecem. Para evitar danos aos olhos devido ao ressecamento, cubra os olhos do camundongo com pomada veterinária oftálmica tópica.
- Com uma pinça romba, agarre a pele na parte de trás da cabeça e, com uma tesoura cega (ou bisturi), faça uma incisão longitudinal de cerca de 1,5 cm para expor o crânio.
- Com a ajuda de um bisturi, coce o periósteo. Tenha cuidado para não coçar com muita força, pois a fixação do espigão da cabeça pode ser comprometida se o crânio começar a sangrar levemente.
- Aplique uma gota do ativador verde (consulte a Tabela de Materiais) no meio do crânio. Isso melhorará a fixação do cimento, aumentando a permeabilidade óssea.
- Prepare o cimento: misture uma colher (ver Tabela de Materiais) de polímero com cinco gotas de monômero e uma gota de catalisador. Com a ajuda de um pincel, aplique uma quantidade generosa da mistura de cimento entre os pontos de referência do crânio lambda e bregma.
- Coloque rapidamente o espigão no cimento com um movimento de deslizamento indo de lambda para bregma. Depois que o espigão for colocado, reaplique mais cimento ao redor da parte inferior para garantir que o espigão grude adequadamente no crânio. Para garantir a fixação adequada, certifique-se de que o cimento seja aplicado em abundância e que seque antes de prosseguir para a próxima etapa.
nota: Com este procedimento de fixação, o espigão de cabeça não se soltará e permitirá testes repetidos a longo prazo; Em nossas mãos, a remoção do headpost é <10%.
- Prepare a mistura de resina aplicando uma proporção de pó para líquido que permita uma consistência suave da mistura. Aplique a resina onde o cimento foi aplicado, bem como ao redor do espigão para proteger sua superfície.
- Aguarde 3 min para que a resina seque e feche a pele na parte de trás das orelhas com sutura de monofilamento. Com um cotonete, aplique solução diluída (10% a 20%) de iodo na área operada.
nota: Certifique-se de que a pele não fique presa à resina.
- Desligue a anestesia e coloque o animal sob uma luz vermelha quente para evitar hipotermia. Coloque alimentos umedecidos e hidrogel ou outra fonte de água à base de gel no chão da gaiola. Não deixe o mouse sem vigilância até que ele recupere a consciência. Assim que o animal se recuperar totalmente do procedimento (geralmente, 30 min a 1 h depois), coloque-o em uma gaiola com grupos de três ou quatro para estimular as interações sociais.