Ecocardiografia de camundongos: uma técnica não invasiva para avaliar a morfologia cardíaca

Resumo

Fonte: Baudouy, D., et al. Exame ecocardiográfico e histológico da morfologia cardíaca no camundongo. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo descreve um protocolo para realizar ecocardiografia em um camundongo de laboratório.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Ecocardiografia

1. Determine o peso corporal do mouse usando uma balança de laboratório padrão, segurando-o levemente pela cauda para garantir o posicionamento adequado.
2. Anestesiar o animal com injeção intraperitoneal (i.p.) de 50 mg/kg de pentobarbital.
   nota: Qualquer outro tipo de anestesia pode ser usado se o mesmo protocolo for usado durante todo o estudo. As vantagens e desvantagens serão discutidas abaixo.
3. Coloque o mouse de volta em sua própria gaiola e espere até que ele não responda, ele mostre respiração constante e os reflexos do pé traseiro estejam ausentes. Para testar isso, aperte um pé levemente e observe se a perna ainda se retrai.
4. Depile o lado esquerdo do tórax e a axila esquerda usando um barbeador comercial para roedores.
   nota: O uso de um barbeador dedicado a roedores permite a remoção completa de pelos finos de camundongos para evitar interferência na medição ecocardiográfica. Cremes ou soluções comerciais de depilação devem ser evitados, pois geralmente são perfumados, o que incomodará o animal depois que ele acordar. Evite o barbear excessivo, pois aumenta a perda de calor.
5. Coloque o animal adormecido em uma almofada quente ajustada para 40–42 °C em uma posição rasa do lado esquerdo, com a cabeça às 12 horas e a cauda às 6 horas. Fixe o braço esquerdo, a perna esquerda e a cauda com fita adesiva.
6. Aplique gel de ecocardiografia pré-aquecido no tórax raspado e na cabeça do transdutor.
7. Coloque o transdutor paraesternal-esquerdo, direcionando-o para o lado direito do pescoço para obter uma visão bidimensional (2D) do eixo longo paraesternal no nível do músculo papilar. Gire o transdutor 90° no sentido horário para obter um eixo curto view no nível do músculo papilar. Use uma configuração de profundidade mínima e um zoom para maximizar a qualidade da imagem e a taxa de quadros. Defina a velocidade de varredura para o máximo.
   1. Para obter essas configurações, diferentes opções de configuração de zoom e profundidade podem ser usadas, dependendo da máquina e do software. Grave imagens no modo M guiadas por 2D na visualização de eixo curto. Consulte a Figura 1A e B.
      nota: Tome cuidado para evitar aplicar pressão excessiva no peito, pois isso pode causar bradicardia.
8. Grave pelo menos 3 séries de 3 loops de cine de batimentos cardíacos para cada animal.
   nota: Para o software de ecocardiógrafo usado neste estudo, pressione o botão "Adquirir/Salvar" apenas uma vez. Esta metodologia é específica para o ecocardiógrafo com este software específico. Outros pacotes de software podem ser usados com máquinas diferentes.
9. Após gravações bem-sucedidas, limpe o gel de ecocardiografia do tórax do camundongo, da almofada de aquecimento e do transdutor. Remova a fita dos membros e da cauda.
10. Deixe o mouse sob observação na almofada de aquecimento, coberto com lenço de papel para evitar exposição desnecessária à luz e perda de calor, até que ele acorde.
11. Coloque o animal de volta em sua gaiola.
12. Analise imagens gravadas do modo M da visão do eixo curto paraesternal para determinar as dimensões e a função do ventrículo esquerdo (VE). Meça a espessura da parede anterior do VE em sístole e diástole (VDVE e VCVEd), os diâmetros sistólico e diastólico final interno do VE (IDVEs e IDVEd) e a espessura da parede posterior do VE (PPVE) em sístole e diástole (VCVEd e PPVEd) usando a identificação da interface tecido-sangue nas imagens armazenadas.
13. Meça as dimensões diastólicas no momento das dimensões diastólicas máximas aparentes do VE e as dimensões sistólicas finais do VE no momento da excursão sistólica mais anterior da parede posterior do VE. Toque na tela sensível ao toque no ícone "Analisar" e depois no ícone "LVAWd". Posicione o paquímetro eletrônico na interface entre a cavidade ventricular direita e a parede anterior do VE na diástole.
14. Posicione o paquímetro eletrônico na interface entre a parede anterior do VE e a cavidade do VE para obter a espessura da parede anterior diastólica do VE; o software mudará diretamente para a medição diastólica final interna do VE.
15. Posicione o paquímetro na interface entre a cavidade do VE e a parede posterior do VE para obter o diâmetro diastólico interno final do VE; o software mudará para a medição da espessura da parede posterior do VE.
16. Posicione o paquímetro na interface entre a parede posterior do VE e o pericárdio para obter a espessura da parede posterior diastólica do VE. Para dimensões sistólicas do VE, toque na tela sensível ao toque no ícone "PAVEs" e posicione o paquímetro eletrônico na interface entre a cavidade ventricular direita e a parede anterior do VE na sístole.
17. Posicione o paquímetro eletrônico na interface entre a parede anterior do VE e a cavidade do VE para obter a espessura da parede anterior sistólica do VE. Repita o processo conforme descrito acima para o diâmetro sistólico final interno do VE e a espessura da parede posterior sistólica do VE. Use a convenção de ponta adotada pela Sociedade Americana de Ecocardiografia para traçar as fronteiras endocárdicas e epicárdicas.
    nota: Os parâmetros da função contrátil do VE serão calculados automaticamente usando as medições anteriores. O encurtamento fracionário do VE (FS) é definido como FS (%) = [(LVIDd - LVIDs)/LVIDd] x 100. A fração de ejeção do VE (FE) é calculada com a fórmula de Teicholz modificada, onde FE (%) = [(LVIDd³ - LVIDs³)/LVIDd³] x 100¹². Consulte a Figura 1A, B.
18. Armazene os dados em discos compactos ou cartões de memória USB e faça cópias de segurança.
19. Importe, analise e exporte os dados usando o software apropriado.

Resultados

Figura 1: Ecocardiografia de resolução padrão (>10 MHz) para medir as dimensões sistólica e diastólica do VE e a função cardíaca em camundongos com hipertrofia cardíaca dilatada após infarto do miocárdio versus animais controle. Registros ecocardiográficos representativos de camundongos normais e saudáveis (A) e animais com dilatação do VE e função reduzida do VE a...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Gel de transmissão de ultrassom; Gel Aquasonic 100	Parker
Sonda de ultrassom linear; L15-7io	Philips Saúde
Ecocardiógrafo; IE33 xMATRIX	Philips Saúde
Máquina de barbear para roedores	Aparelho de Harvard	34-0243