Artigo de método

Isolamento de células mesoteliais: uma técnica para isolar células mesoteliais primárias de espécimes de tecido de omento humano

30 de abril de 2023

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Peters, P. N. et al. Modelando os Primeiros Passos da Disseminação do Câncer de Ovário em uma Cultura Organotípica da Cavidade Peritoneal Humana. J. Vis. Exp. (2015)

Este vídeo descreve o protocolo para isolar células mesoteliais humanas primárias da amostra de omento humano. As células mesoteliais podem ser usadas para estabelecer um modelo de câncer de ovário in vitro para investigar a adesão, invasão e proliferação de células de câncer de ovário.

Protocolo

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Todos os procedimentos envolvendo participantes humanos foram realizados em conformidade com as diretrizes institucionais, nacionais e internacionais para o bem-estar humano e foram revisados pelo conselho de revisão institucional local.

1. Isolamento e Cultura de Células Estromais Primárias Não Transformada

  1. Coleta e preparação de tecidos humanos.
    1. Obtenha amostras de omento humano, 2 cm3, removidas durante uma cirurgia abdominal e mergulhe imediatamente o tecido em solução salina tamponada com fosfato RT (PBS) (Figura 1A). Um pedaço de omento de 3 cm x 2 cm normalmente pro....

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Resultados

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Figura 1. Isolamento de células omentais humanas primárias. (A) Um pedaço de omento é coletado na cirurgia em PBS e transportado para o laboratório. O tecido é peletizado a 0,5 x g x 3 min e transferido para PBS fresco. (B) O pedaço de omento é transferido para uma placa de Petri de 10 cm, lavado com PBS, e bisturis são usado.......

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
PbsFisher CientíficoSH3001304
Lâminas de barbear de um gumeFisher Científico12-640
Pratos de cultura de 15 cmBD Biociências353025
Soro fetal bovino (FBS)Tecnologias da Vida16000044_3616914956
DMEM com L-GlutaminaCorning10-013-CV
Vitaminas MEMCorning25-020-CL
Aminoácidos não essenciais MEMCorning25-025-CI
Penicilina-estreptomicina Corning30-002-CI
shakerThermo-FisherMaxQ 4450
centrifugaEppendorfRolamento 5702
incubadoraThermo-FisherIncubadora de CO2 com camisa de água Forma Série II Modelo 3100
Frascos T-75BD Biociências353136
Frascos T-175BD Biociências353112
Pontas de pipetaRaininP2, P10, P20, P200 e P1000
microscópioZeissAxiovert 200m
Anticorpo anti-integrina αVβ3, clone LM609EMD MilliporeMAB1976
Beta 1OncosynergySistema Operacional 2966
Alfa 5 [CD49e]ID Pharmingen555615
Beta 4 [CD104]EMD MilliporeMAB 2058
Pontas de pipetaCorningPonteiras filtradas P2, P10, P20, P200 e P1000
Frasco de vidro

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Etiquetas

Mesothelial Cell IsolationHuman Omentum TissuePrimary Mesothelial CellsTissue MincingDensity SeparationCell CentrifugationGrowth Medium IncubationLight Microscopy ObservationCytokeratin 8 ExpressionVimentin Expression

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