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Todos os procedimentos envolvendo animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.
1. Injeção intraperitoneal de células
NOTA: Em nossos experimentos, os camundongos são manuseados em um fluxo de ar laminar ou gabinete de biossegurança dentro de nossas instalações de barreira para limitar o risco de exposição a patógenos. Para demonstrar claramente essa técnica, os procedimentos no vídeo que acompanha foram realizados em um laboratório aprovado para o trabalho com animais. Esta técnica específica não requer que os animais estejam sob anestesia. De acordo com protocolos aprovados, realizar esta técnica em animais vivos. Use cepas apropriadas de camundongos para este estudo. Por exemplo: usar camundongos nus atímicos imunocomprometidos para o estudo da colonização de células de câncer de ovário humano (SKOV3ip.1 e HeyA8); usar camundongos C57BL/6 imunocompetentes para estudo da colonização de células de câncer de ovário de camundongo (ID8).
- Coloque 500 μl de suspensão de célula única de células de câncer de ovário em uma seringa e coloque na agulha estéril tampada de 25 G. Isso reduz o cisalhamento celular antes da injeção.
- Pegue o mouse pela nuca e segure a cauda usando a palma da mão e o indicador e fixe a perna traseira esquerda entre o dedo anelar e o dedo mínimo (quando o mouse estiver preso com a mão esquerda).
NOTA: Para evitar traumatizar os órgãos abdominais, prenda bem o mouse para que ele não possa se mover durante a injeção.
- Imagine uma linha no abdômen logo acima dos joelhos e localize um ponto no lado direito do animal e próximo à linha média. O ponto de entrada é cranial e ligeiramente medial do último mamilo.
nota: Inserir a agulha no lado direito do camundongo evita o ceco e reduz o risco de perfurar os intestinos.
- Insira a agulha na região lateral inferior do abdômen dos camundongos a uma profundidade de aproximadamente 0,5 cm. Puxe o êmbolo para trás para confirmar que a agulha não penetrou em um vaso sanguíneo ou outros órgãos peritoneais.
- Se algum fluido for aspirado, descarte a seringa (e a amostra). Um aspirado marrom-esverdeado ou amarelo indica a penetração da agulha nos intestinos ou na bexiga, respectivamente.
- Injetar a amostra utilizando uma pressão lenta e constante. Retire a agulha e retorne o mouse à sua gaiola. Não volte a tampar a seringa antes de a descartar num recipiente afiado.
- Sacrifique camundongos por meio de asfixia por CO2 e remoção de órgãos vitais em um ponto de tempo específico após a injeção.