Colheita de depósitos de gordura peritoneal: uma técnica para estudar a colonização por câncer de ovário de tecidos adiposos peritoneais em modelos de camundongos

Resumo

Fonte: Krishnan, V. et al. In Vivo e Abordagens Ex Vivo para Estudar a Colonização Metastática do Câncer de Ovário de Estruturas de Manchas Leitosas no Tecido Adiposo Peritoneal. J. Vis. Exp. (2015)

Neste vídeo, usamos um modelo de camundongo fêmea sacrificado com câncer de ovário. Em seguida, descrevemos um protocolo para identificar e extrair depósitos de gordura ou tecidos adiposos associados aos cinco órgãos peritoneais primários para estudar a colonização de células cancerígenas metastáticas.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparando animais para estudos experimentais

1. Permitir que os animais se adaptem a novos alojamentos e ambientes, para se recuperarem de potenciais efeitos fisiológicos do transporte e manuseio.
   nota: A técnica a seguir é aplicável a todas as cepas de camundongos disponíveis comercialmente. O número de animais a serem usados para um experimento depende do desenho do estudo e deve ser feito com a consulta de um estatístico.

2. Identificação e Isolamento de Depósitos de Gordura Peritoneal

1. Eutanásia de animais por overdose de CO₂ e um método físico secundário para confirmar a morte.
2. Como a coleta de depósitos de gordura peritoneal constitui a remoção de órgãos internos (método secundário), faça uma incisão na linha média perto das papilas inguinais através da parede peritoneal para expor os órgãos internos (Figura 1A).
3. Para a gordura omental (MO), exponha o complexo omental / pancreático estendendo o baço da cavidade peritoneal com fórceps (Figura 1C). Libere omento do pâncreas e do baço aparando de perto todas as conexões do tecido. Certifique-se de que qualquer tecido pancreático remanescente seja excisado.
4. Para a gordura gonadal (GF), use uma pinça para levantar a gordura gonadal ao redor dos ovários e excise cortando as conexões dos tecidos (Figura 1A superior direita).
5. Para a gordura uterina (UF), use uma pinça para levantar a gordura uterina ao redor dos cornos uterinos e excise cortando as conexões dos tecidos (Figura 1A inferior direita).
6. Para a gordura mesentérica (MF), corte a junção entre o intestino delgado e o piloro. Use uma pinça para segurar firmemente a extremidade livre do intestino delgado e lentamente "retire-a" da gordura mesentérica. Libere a gordura mesentérica da raiz mesentérica usando uma tesoura de dissecação (Figura 1A inferior esquerda).
7. Para a gordura esplenoportal (SF), levante a extremidade distal do baço usando uma pinça para expor a fina faixa de tecido adiposo que conecta o hilo do baço ao pâncreas. Extirpar a gordura esplenoportal, libertando-a primeiro do pâncreas e depois dissecando-a cuidadosamente do baço (Figura 1B).

Resultados

Figura 1. As localizações e estruturas relativas dos principais depósitos adiposos peritoneais. (UMA)Dissecção anatômica macroscópica mostrando a localização relativa de quatro das cinco fontes primárias de gordura peritoneal. O omento (MO; delineado), gordura gonadal (GF), gordura uterina (UF), mesentério (MY), ovário (ov), cornos uterinos (uh) e intestino delgado (si) são mostrados. (B) Gordura esplenoportal (SP; delineada) exposta levantando o baço com fórceps. (C) O omento de camundongo mostrado dissecado livre do pâncreas para melhorar a visualização. (D)Tamanhos e estruturas relativos da gordura peritoneal excisada; o mesentério é mostrado ligado à raiz mesentérica. (E) Avaliação histológica da gordura peritoneal para a presença de manchas leitosas – (A) adipócitos, (MS) mancha leitosa.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Ferramentas de dissecação	Ferramentas de Belas Ciências	NA
Pbs	Corning	21-040-CV	Sem cálcio e magnésio