Colheita de depósitos de gordura peritoneal: uma técnica para estudar a colonização por câncer de ovário de tecidos adiposos peritoneais em modelos de camundongos

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparando animais para estudos experimentais

1. Permitir que os animais se adaptem a novos alojamentos e ambientes, para se recuperarem de potenciais efeitos fisiológicos do transporte e manuseio.
   nota: A técnica a seguir é aplicável a todas as cepas de camundongos disponíveis comercialmente. O número de animais a serem usados para um experimento depende do desenho do estudo e deve ser feito com a consulta de um estatístico.

2. Identificação e Isolamento de Depósitos de Gordura Peritoneal

1. Eutanásia de animais por overdose de CO₂ e um método físico secundário para confirmar a morte.
2. Como a coleta de depósitos de gordura peritoneal constitui a remoção de órgãos internos (método secundário), faça uma incisão na linha média perto das papilas inguinais através da parede peritoneal para expor os órgãos internos (Figura 1A).
3. Para a gordura omental (MO), exponha o complexo omental / pancreático estendendo o baço da cavidade peritoneal com fórceps (Figura 1C). Libere omento do pâncreas e do baço aparando de perto todas as conexões do tecido. Certifique-se de que qualquer tecido pancreático remanescente seja excisado.
4. Para a gordura gonadal (GF), use uma pinça para levantar a gordura gonadal ao redor dos ovários e excise cortando as conexões dos tecidos (Figura 1A superior direita).
5. Para a gordura uterina (UF), use uma pinça para levantar a gordura uterina ao redor dos cornos uterinos e excise cortando as conexões dos tecidos (Figura 1A inferior direita).
6. Para a gordura mesentérica (MF), corte a junção entre o intestino delgado e o piloro. Use uma pinça para segurar firmemente a extremidade livre do intestino delgado e lentamente "retire-a" da gordura mesentérica. Libere a gordura mesentérica da raiz mesentérica usando uma tesoura de dissecação (Figura 1A inferior esquerda).
7. Para a gordura esplenoportal (SF), levante a extremidade distal do baço usando uma pinça para expor a fina faixa de tecido adiposo que conecta o hilo do baço ao pâncreas. Extirpar a gordura esplenoportal, libertando-a primeiro do pâncreas e depois dissecando-a cuidadosamente do baço (Figura 1B).

Figura 1. As localizações e estruturas relativas dos principais depósitos adiposos peritoneais. (UMA)Dissecção anatômica macroscópica mostrando a localização relativa de quatro das cinco fontes primárias de gordura peritoneal. O omento (MO; delineado), gordura gonadal (GF), gordura uterina (UF), mesentério (MY), ovário (ov), cornos uterinos (uh) e intestino delgado (si) são mostrados. (B) Gordura esplenoportal (SP; delineada) exposta levantando o baço com fórceps. (C) O omento de camundongo mostrado dissecado livre do pâncreas para melhorar a visualização. (D)Tamanhos e estruturas relativos da gordura peritoneal excisada; o mesentério é mostrado ligado à raiz mesentérica. (E) Avaliação histológica da gordura peritoneal para a presença de manchas leitosas – (A) adipócitos, (MS) mancha leitosa.