Desparafinização e reidratação de seções de tecido: um procedimento de duas etapas para remover cera de parafina de lâminas de tecido FFPE seguida de reidratação de tecido

Resumo

Fonte: Sugimoto, K. et al. Análise de todo o genoma da metilação do DNA no câncer gastrointestinal. J. Vis. Exp. (2020)

Neste vídeo, demonstramos o processamento de FFPE ou seções embebidas em parafina fixadas em formalina obtidas de tecido tumoral gastrointestinal. As etapas de desparafinização e reidratação permitem o processamento da amostra de tecido para aplicações analíticas subsequentes.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo participantes humanos foram realizados em conformidade com as diretrizes institucionais, nacionais e internacionais para o bem-estar humano e foram revisados pelo conselho de revisão institucional local.

1. Lavando os slides

1. Prepare 10 μm de seções não coradas fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE).
2. Coloque as lâminas em um suporte de lâminas de vidro: use cerca de 3-5 lâminas transversais maiores, a menos que o tecido seja mínimo e sejam necessárias mais lâminas.
3. Encha o suporte da lâmina com xileno e certifique-se de que todo o tecido da lâmina esteja submerso. Deixe descansar por 15 min.
4. Após 15 min, despeje o xileno com as lâminas presas com uma ponta de pipeta para que as lâminas não caiam.
5. Despeje mais xileno no mesmo nível de antes. Deixe descansar por mais 15 min.
6. Após 15 min, despeje o xileno novamente.
7. Encha o suporte da lâmina com etanol 100% (EtOH) e certifique-se de que todo o tecido da lâmina esteja totalmente submerso. Deixe descansar por 3 min.
8. Despeje o EtOH enquanto segura cuidadosamente as lâminas. Reabasteça no mesmo nível com mais EtOH. Deixe descansar por 2 min.
9. Despeje o EtOH novamente e remova a lâmina. Coloque-os cuidadosamente virados para cima em uma toalha de papel limpa para secar. Deixe descansar por 10 min.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
xileno	Sigma-Aldrich	214736
100% Etanol	Sigma-Aldrich	24194