Todos os procedimentos envolvendo participantes humanos foram realizados em conformidade com as diretrizes institucionais, nacionais e internacionais para o bem-estar humano e foram revisados pelo conselho de revisão institucional local.
1. Coloração
- Antes de prosseguir com a coloração, limpe o excesso de soluções ao redor do tecido na lâmina com papel de seda.
- Coloque as lâminas em condições de temperatura e umidade ambiente para evitar o ressecamento do tecido na lâmina durante todo o processo de coloração.
- Oxide as lâminas com algumas gotas de permanganato de potássio por 5 min. Certifique-se de que o volume de permanganato de potássio seja suficiente para cobrir a seção de tecido em cada lâmina.
- Enxágue as lâminas oxidadas com água destilada em uma jarra Coplin com 2-3 trocas. Observe a cor azul do tecido.
- Agora, branqueie essas lâminas adicionando algumas gotas de ácido oxálico por 5 min. Certifique-se de que o volume de ácido oxálico seja suficiente para cobrir completamente a seção de tecido em cada lâmina.
- Enxágue as lâminas mergulhando-as no frasco Coplin cheio de água destilada. Execute o enxágue 2x-3x.
- Agora, lave essas lâminas brevemente em álcool a 95% e, em seguida, mergulhe as lâminas em uma solução de elastina (5 g / L) por 8-24 h.
nota: A solução de elastina é volátil e seu tempo de coloração é relativamente longo, por isso é melhor mergulhar as lâminas com coloração elástica em um recipiente lacrado, como um frasco de vidro transparente com tampa de vedação. A capacidade do recipiente e o volume da solução de elastina dependem do número de lâminas imersas, desde que permita a imersão completa de todas as lâminas.
- Mergulhe essas lâminas diretamente em etanol a 95% por 1-2 min para diferenciar bem cada seção de tecido.
nota: A diferenciação refere-se à mudança na carga da seção do tecido, que remove o excesso de manchas absorvidas pelo tecido e torna as cores mais claras. Após a coloração da solução de elastina, as amostras não devem ser lavadas com água destilada para evitar qualquer dificuldade de diferenciação. Verifique microscopicamente, conforme necessário, se há manchas de fibras elásticas azul-pretas e fundo cinza. É melhor diferenciar ligeiramente o tecido, pois a contracoloração de Van Gieson subsequente também pode extrair um pouco a mancha elástica.
- Enxágue completamente essas lâminas com água destilada após a diferenciação.
- Contra-corar as lâminas na solução de Van Gieson por 1 min.
nota: O volume da solução de Van Gieson precisa ser suficiente para poder imergir completamente a seção de tecido em cada lâmina.
