Divisão de esferóides para subcultura e transporte: um procedimento para propagar e transferir esferóides de tumor neuroendócrino do intestino delgado

Resumo

Fonte: Ear, P. H. et al. Estabelecimento e Caracterização de Esferóides de Tumores Neuroendócrinos do Intestino Delgado. (2019)

Este vídeo demonstra uma estratégia para dividir e propagar esferoides desenvolvidos a partir de células tumorais neuroendócrinas do intestino delgado. Esses esferóides têm marcadores tumorais neuroendócrinos do intestino delgado e podem ser propagados e usados para testar drogas anticâncer.

Protocolo

1. Dividindo esferoides SBNET

NOTA: Isso é feito para expansão e compartilhamento com outros pesquisadores.

1. Use uma pipeta P1000 para quebrar mecanicamente o ECM e aspire o ECM com esferoides SBNET para um tubo estéril de 1,5 mL.
2. Centrifugar a 1.000 x g a 4 °C, retirar todo o sobrenadante e colocar o tubo sobre gelo.
3. Adicione 2-4x o volume do novo ECM ao pellet. Misture o novo ECM com os antigos esferóides ECM e SBNET pipetando para cima e para baixo 10x, evitando a introdução de bolhas de ar.
4. Transfira 5-20 μL da mistura de esferoides ECM e SBNET para uma nova placa e permita que o ECM solidifique.
5. Cubra com novo meio SBNET e transfira para a incubadora. A taxa de recuperação é de aproximadamente 95% a 100%.
6. Para enviar esferoides SBNET para outro laboratório, transfira os esferoides SBNET com novo ECM para um frasco T25 e permita que o ECM solidifique.
7. Encha o frasco T25 com meio esferóide SBNET, aperte bem a tampa e prepare o pacote de remessa.
8. Ao receber uma cultura de esferoides SBNET, remova o meio de cultura e execute as etapas 1.1 a 1.5 para colocar os esferoides SBNET de volta na cultura.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
DMEM	Gibco	11965-092	Meio para preparação de tecidos
DMEM/F-12	Gibco	11320-033	Meio para culturas organoides
FBS	Gibco	16000044	Reagente para meios de cultura
glutamina	Gibco	A2916801	Reagente para meios de cultura
insulina	sigma	I0516	Reagente para meios de cultura
Matrigel	Corning	356235	Matriz para embutir e ancorar organoides
nicotinamida	sigma	Rolamento 72340	Reagente para meios de cultura
CANETA/STREP	Gibco	15140-122	Reagente para meios de cultura