$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Dividindo esferoides SBNET
NOTA: Isso é feito para expansão e compartilhamento com outros pesquisadores.
- Use uma pipeta P1000 para quebrar mecanicamente o ECM e aspire o ECM com esferoides SBNET para um tubo estéril de 1,5 mL.
- Centrifugar a 1.000 x g a 4 °C, retirar todo o sobrenadante e colocar o tubo sobre gelo.
- Adicione 2-4x o volume do novo ECM ao pellet. Misture o novo ECM com os antigos esferóides ECM e SBNET pipetando para cima e para baixo 10x, evitando a introdução de bolhas de ar.
- Transfira 5-20 μL da mistura de esferoides ECM e SBNET para uma nova placa e permita que o ECM solidifique.
- Cubra com novo meio SBNET e transfira para a incubadora. A taxa de recuperação é de aproximadamente 95% a 100%.
- Para enviar esferoides SBNET para outro laboratório, transfira os esferoides SBNET com novo ECM para um frasco T25 e permita que o ECM solidifique.
- Encha o frasco T25 com meio esferóide SBNET, aperte bem a tampa e prepare o pacote de remessa.
- Ao receber uma cultura de esferoides SBNET, remova o meio de cultura e execute as etapas 1.1 a 1.5 para colocar os esferoides SBNET de volta na cultura.