Seccionamento, coloração e imagem TEM de exossomos incorporados: um protocolo para visualizar as características estruturais de exossomos usando TEM

Resumo

Fonte: Jung, M. K. et al. Preparação de amostras e imagens de exossomos por microscopia eletrônica de transmissão. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo descreve a técnica para preparar uma seção fina de exossomos incorporados. Essas seções podem ser coradas e fotografadas usando microscopia eletrônica de transmissão, ou TEM, para estudar as características estruturais dos exossomos.

Protocolo

1. Secção dos exossomos

1. Preparar o bloco de exossomas incorporando a amostra de exossoma purificada (obtida a partir do sobrenadante de cultura de células HCT116) numa mistura de inclusão pura de baixa viscosidade.
2. Corte o bloco de exossomos com 60 nm de espessura através de um ultramicrótomo.
3. Coloração dupla com acetato de uranila a 2% por 20 min e citrato de chumbo por 10 min.
   Para a solução de chumbo Reynolds, adicione 1,33 g de nitrato de chumbo e 1,76 g de citrato de sódio a um total de 50 mL de água destilada.
4. Observe a grade sob microscopia eletrônica de transmissão a 80 kV.
5. Clique em "Adquirir" e, em seguida, clique em "File" e "Salvar como" no sistema de câmera CCD sob o microscópio eletrônico a 80 kV. Siga as configurações automáticas para o tempo de exposição.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Ultra-micrótomo	Leica	UCT
Acetato de uranilo	ems	22400	Produto químico perigoso
Citrato de chumbo	ems	17900
Microscopia Eletrônica de Transmissão	Hitachi	H7600
Grade de níquel	ems	G200-Ni
Grade de cobre	ems	G200-
Microscopia Eletrônica de Transmissão	JEOL	JEM2200FS