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Coloração negativa de exossomos purificados: um procedimento para visualizar a morfologia do exossomo usando microscopia eletrônica de transmissão

30 de abril de 2023

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Jung, M. K. et al. Preparação de amostras e imagens de exossomos por microscopia eletrônica de transmissão. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo descreve um procedimento para coloração negativa de exossomos purificados. Os exossomos corados negativamente são fotografados usando microscopia eletrônica de transmissão. Essa técnica ajuda a visualizar a morfologia dos exossomos.

Protocolo

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1. Coloração negativa

  1. Descarregue com brilho as grades EM de cobre de 200 mesh revestidas com filme de carbono por 1 min por descarregador de brilho.
  2. Corrigir exossomos purificados com 1 mL de paraformaldeído (PFA) a 2% por 5 min.
    NOTA: Os vapores de paraformaldeído são tóxicos. Todo o trabalho deve ser feito em uma hotte ventilada.
  3. Carregue 5-7 μL de solução de suspensão de exossomo na grade e incube por 1 min. Se a concentração de exossomo for muito alta, dilua a concentração para metade a um quinto.
  4. Imediatamente corar com as ~ 20 gotas de solução filtrada de acetato de uranila a 1% (UA) na superfície da grade EM por seringa.
  5. Remova o excesso de solução de UA da grade entrando em contato com a borda da grade com papel de filtro.
  6. Enxágue rapidamente a grade com uma gota de água. Esta etapa removerá o excesso de solução de coloração.
  7. Coloque a grade sobre a mesa segurando-a com uma pinça e cubra a grade parcialmente com uma placa de cultura para secar por 10 min em temperatura ambiente.
  8. Armazene a grade em uma caixa de grade EM para observação futura por um MET a 80 kV.

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Acetato de uraniloems22400Produto químico perigoso
Microscopia Eletrônica de TransmissãoJEOLJEM2200FS
Descarregador de brilhoJEOLJFC1100E
ParaformaldeídoemsRolamento 19210
Cobre revestido de carbono Formvar
Grade (200 mesh)		emsFCF200-
Formvar revestido de carbono Níquel
Grade (200 mesh)		emsFCF200-NI

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Etiquetas

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