Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Gastrectomia vertical vertical e procedimentos simulados
- No dia da cirurgia, pesar os camundongos para obter uma medida de peso basal.
- Equipe a sala cirúrgica com sistema de anestesia, banho-maria aquecido e almofada de aquecimento. Defina o banho-maria para 37 °C e use-o para aquecer solução salina a 0,9% para irrigação. Limpe o campo cirúrgico com etanol a 70% e use técnica estéril para abrir o pacote de cirurgia autoclavada e as ferramentas.
nota: A almofada de aquecimento é usada para manter o animal aquecido durante a cirurgia e a recuperação da anestesia.
- Usando uma câmara de indução, anestesiar o camundongo com isoflurano a 5% e vazão de O2 de 1 L/min. Confirme se o camundongo está no plano apropriado de anestesia realizando uma pinça do dedo do pé. Mantenha o camundongo com 1-3% de isoflurano e uma taxa de fluxo de O2 de 0,6 L / min assim que um plano consistente de anestesia for alcançado.
- Depois que o camundongo estiver anestesiado, coloque pomada para os olhos (consulte a Tabela de Materiais) em seus olhos para mantê-los úmidos durante a cirurgia. Neste momento, administre também um analgésico, como o meloxicam (2 mg/kg por via subcutânea). Prenda o cabelo do umbigo à axila, segurando a pele suavemente para fornecer tensão.
- Como a pele do rato é fina e delicada, tome cuidado para não causar lesões na pele ao cortar o cabelo. Limpe a pele com iodopovidona e álcool.
- Coloque luvas estéreis e prepare o campo cirúrgico estéril e os instrumentos. Execute o restante do procedimento usando técnica estéril. Prepare o campo cirúrgico estéril colocando campos cirúrgicos estéreis em ambos os lados do mouse. Use papel alumínio autoclavado para criar uma cortina cirúrgica para o mouse.
- Faça um pequeno orifício na folha de estanho para permitir o acesso ao abdômen do rato.
- Faça uma incisão da pele do meio do abdômen (umbigo) até o nível da cartilagem xifóide usando uma tesoura de íris. Identifique a linha alba e use uma tesoura de íris para cortar a parede do corpo ao longo da linha alba. Use CTAs para elevar suavemente o estômago para fora do abdômen e, em seguida, dissecar sem rodeios o omento maior da curvatura maior do estômago.
- Ligue a artéria gástrica curta que corre entre o fundo do estômago e o baço, colocando duas ligaduras usando sutura absorvível de monofilamento 7-0. Use uma tesoura de mola para cortar entre as duas ligaduras. Uma vez que a artéria é seccionada, exteriorize totalmente o estômago da cavidade abdominal. Coloque gaze sob o estômago e molhe com solução salina para manter o tecido úmido.
- Para o procedimento VSG, ligar os ramos proeminentes da artéria e veia gástrica com sutura absorvível monofilamentar 7-0 com uma agulha cônica usando 3 arremessos para cada nó. Coloque as ligaduras logo abaixo (ou seja, em direção à curvatura menor do estômago) da linha de transecção pretendida.
nota: A linha de transecção pretendida começa em ~ 2 mm acima (ou seja, em direção à maior curvatura do estômago) da incisura cardíaca do estômago e pelo menos 2 mm abaixo da margo pilcatus e se estende até a extremidade proximal do lobo direito do pâncreas. Normalmente, existem 4 vasos por parede gástrica que precisam ser ligados; no entanto, isso pode variar entre os camundongos.
- Para evitar o derramamento do conteúdo gástrico durante a gastrectomia, coloque uma linha contínua simples de sutura passando por ambas as paredes gástricas logo abaixo da linha de transecção pretendida usando uma sutura absorvível de monofilamento 6-0 com uma agulha cônica. Comece a linha de sutura à direita do esôfago do cirurgião e abaixo da margo pilcatus e termine logo acima do pâncreas.
- Coloque hemostáticos de ponta fina acima da linha de sutura e use uma tesoura de mola para cortar entre a linha de sutura e os hemostáticos. Remova o tecido gástrico seccionado do campo cirúrgico estéril. Use CTAs para limpar o sangue e digerir o estômago.
- Reforçar a aposição das paredes gástricas com sutura absorvível monofilamentar 6-0 com agulha cônica com padrão descontínuo simples.
nota: Recomenda-se um padrão de sutura descontínuo simples, pois fornece um fechamento mais seguro do que o padrão de sutura contínua simples.
- Lave o remanescente gástrico com solução salina durante todo o procedimento para manter o tecido úmido e limpo. Use uma agulha de gavagem 20G conectada a uma seringa de 20 mL para realizar a lavagem gástrica com solução salina. Use este tamanho para garantir que a pressão adequada seja fornecida sem correr o risco de danos ao tecido gástrico devido à pressão excessiva ou danos acidentais ao tecido gástrico devido ao uso de uma agulha pontiaguda regular.
- Use um mínimo de 20 nós para fechar o estômago com segurança; preste atenção ao fechamento ao longo do lado esofágico, pois esse lado é mais difícil de acessar e, portanto, geralmente é um local de deiscência.
- Certifique-se de que não há vazamentos pressionando suavemente o estômago com CTAs. Se forem identificados vazamentos, coloque nós descontínuos simples adicionais nas áreas de vazamento e, em seguida, teste de vazamento novamente. Teste de vazamento até que nenhum vazamento seja detectado.
- Faça uma lavagem final completa do estômago usando pelo menos 60 mL de solução salina para garantir que nenhum material particulado infeccioso tenha sido deixado para trás.
- Coloque o estômago de volta na cavidade abdominal sob o fígado usando uma CTA. Coloque CTAs ao longo do aspecto dorsal da cavidade abdominal para absorver todo o excesso de líquido. Usando uma agulha romba 18G, injete solução de Ringer com lactato (LRS) com ou sem antibióticos (0,5 mL LRS +/- 20 mg/kg de Enrofloxacina) diretamente na cavidade abdominal, imediatamente antes do fechamento.
nota: Isso substitui a perda de fluido experimentada durante a cirurgia e fornece um método para aplicação direta de antibióticos no local da cirurgia para ajudar na recuperação.
- Feche a camada muscular abdominal usando uma sutura absorvível monofilamentar 6-0 com uma agulha cônica em um padrão descontínuo simples. Em seguida, feche a camada de pele com sutura absorvível monofilamentar 6-0 em um padrão contínuo simples.
- Coloque adesivo de tecido na pele e dobre a pele sobre a linha de sutura para enterrar a sutura para que o camundongo não possa interromper o fechamento da ferida no pós-operatório.
- Desligue o isoflurano e deixe o mouse se recuperar na almofada de aquecimento por 10 a 15 minutos antes de devolvê-lo à sua gaiola inicial. Não deixe o animal sozinho até que ele recupere a consciência e seja capaz de se mover.
- Manter os animais alojados individualmente até que estejam totalmente recuperados da cirurgia.
nota: Se medições precisas da ingestão de alimentos forem obtidas ao longo do estudo, os camundongos devem continuar a ser alojados individualmente durante todo o estudo. Existe o risco de obstrução de corpo estranho ao comer roupas de cama em gaiolas domésticas. Os animais devem ser alojados em gaiolas livres de cama, exceto para material de nidificação para proporcionar enriquecimento (ver Tabela de Materiais).
