Extração do músculo esquelético dos membros posteriores: um procedimento para extirpar os músculos esqueléticos dos membros posteriores do modelo murino

Resumo

Fonte: Bonetto, A. et al. O camundongo portador de tumor de carcinoma de cólon-26 como modelo para o estudo da caquexia do câncer. J. Vis. Exp. (2016)

Neste vídeo, descrevemos o procedimento para extirpar os músculos esqueléticos dos membros posteriores de um modelo de camundongo. Os músculos excisados podem ser armazenados em temperaturas mais baixas até uma análise posterior a jusante.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Excisão de tecidos e órgãos

NOTA: Para uso de tecidos em ensaios bioquímicos ou de biologia molecular, planeje pesar cada órgão e tecido e colocar um fragmento imediatamente em criotubos pré-rotulados. Congelar em nitrogênio líquido e armazenar a -80 °C.

1. Para evitar a contaminação de amostras de tecido com pele, borrife etanol 70% em todo o corpo.
2. Coloque o mouse em uma cama de dissecção em decúbito dorsal e estenda um membro verticalmente prendendo o pé a uma braçadeira de bureta elevada.
3. Segure a pele do membro inferior com uma pinça Dumont e use a tesoura fina curva para remover suavemente a pele e a fáscia, expondo os ventres musculares subjacentes do membro inferior.
4. Identifique o músculo gastrocnêmio no membro inferior posterior por sua origem nos côndilos lateral e medial no fêmur posterior e sua inserção no calcâneo através do tendão do calcâneo.
   1. Prossiga para cortar o tendão do calcâneo gastrocnêmio. Segure a extremidade distal do gastrocnêmio com uma pinça de Dumont e puxe o ventre muscular em direção à sua origem. Usando uma tesoura, corte o músculo na origem o mais próximo possível do fêmur. Coloque o músculo em um prato. Pese imediatamente e congele em um tubo em nitrogênio líquido.
      nota: Certifique-se de não extirpar o músculo sóleo junto com o gastrocnêmio. Se isso ocorrer, remova cuidadosamente o sóleo, puxando-o suavemente com a pinça.
5. Prossiga para identificar e extirpar o músculo tibial anterior de sua origem na superfície anterolateral da tíbia e sua inserção no cuneiforme medial através de seu tendão distal.
   1. Para ter alavancagem, segure o pé segurando os dedos com o dedo indicador e o polegar. Insira a ponta da pinça Dumont imediatamente sob o tendão distal superficial do tibial e mova a pinça de forma que o lado rombudo possa ser usado para separar o ventre do músculo tibial do tecido conjuntivo subjacente.
   2. Corte o tendão distal usando a tesoura curva fina e, em seguida, corte o músculo na origem o mais próximo possível da tíbia.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Camundongos CD2F1	Harlan	60
Aparelho de anestesia	EZ-Anestesia	EZ-7000
Outubro	Tecido-Tek	Nº 4583
Criostato	Leica	CM1850
Discos de cortiça	Ciências da Microscopia Eletrônica	Nº 63305
Microtainer	Bd	365873
Superfrost mais lâminas de vidro	VWR	Rolamento 48311-703
Estreptomicina-Penicilina	Cellgro	30-002-CI