Inoculação intramucosa de células cancerígenas em modelo murino: um procedimento para estabelecer um modelo ortotópico de câncer de cabeça e pescoço em camundongos

Resumo

Fonte: Oweida, A. J. et al. Inoculação intramucosa de células de carcinoma de células escamosas em camundongos para perfil imunológico tumoral e avaliação da resposta ao tratamento. J. Vis. Exp. (2019)

Neste vídeo, desenvolvemos um modelo murino ortotópico de câncer de cabeça e pescoço por inoculação intramucosa da linhagem celular de carcinoma de células escamosas. O camundongo portador de tumor mostraria semelhança com sintomas clinicamente relevantes de doenças humanas e, portanto, pode ser usado para estudar a progressão do câncer e descobrir novas estratégias terapêuticas.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Injeção de células em camundongos

1. Prepare uma mistura 1:1 de células:matriz de membrana basal (50 μL cada).
2. Adicione as células primeiro; em seguida, pipete gradualmente a matriz da membrana basal. Evite introduzir bolhas de ar. Certifique-se de que a mistura é feita imediatamente antes da injeção do animal. Adicionar células à matriz da membrana basal por um longo período de tempo pode resultar na acomodação das células na mistura da matriz, o que torna a mistura difícil de agitar vigorosamente. Isso causará uma variabilidade considerável no tamanho do tumor entre os camundongos.
3. Misture delicadamente. Certifique-se de que todas as etapas envolvendo a matriz sejam executadas no gelo. A matriz da membrana basal irá polimerizar à temperatura ambiente.
4. Prepare seringas para inoculação.
5. Carregue seringas de insulina de 0,5 mL (23G) com 100 μL da solução de matriz celular/membrana basal.
6. Mantenha as seringas no gelo para evitar a polimerização da matriz da membrana basal.
7. Anestesiar camundongos colocando-os em uma câmara com isoflurano e oxigênio (2,5%).
8. Certifique-se de que os ratos estão profundamente anestesiados antes de realizar a injeção (garantindo a falta de resposta a um beliscão do dedo do pé).
9. Insira a agulha na região vestibular direita ou esquerda. Isso é realizado através do espaço aberto disponível em ambos os lados da boca.
10. Certifique-se de que a língua do mouse não esteja no caminho.
    NOTA: É fácil cutucar a língua, o que resultará em tumores na língua. Mova a língua para o lado oposto, se necessário.
11. Mantenha a seringa paralela à região bucal enquanto estiver dentro da cavidade oral.
12. Quando estiver pronto para injetar, puxe a seringa para trás e insira lentamente a seringa em um ângulo de 10°.
13. Injetar 100 μL da suspensão da matriz da membrana celular/basal durante um período de 5 s.
14. Segure a seringa no lugar por mais 5 s para garantir que todo o material seja injetado.
    NOTA: Para camundongos não portadores de tumor, injete uma mistura de meio e matriz sem soro (conforme descrito acima) sem as células tumorais.
15. Retire a seringa com cuidado.
16. Continue o procedimento acima com os mouses restantes.
17. Aguarde 1 semana até que os tumores comecem a aparecer macroscopicamente (50–200 mm³ para células B4B8 e LY2).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
HBSS	ThermoFisher Scientific	14175079	Sem cálcio, sem magnésio, sem feno vermelho
Citômetro de massa de Helois	Fluidigm	NA
Matriz de membrana Matrigel	Corning	CB-40234B