Pré-tratamento de tecido FFPE para RNA CISH: um procedimento para processar seções de tecido embebidas em parafina fixadas em formalina para hibridização in situ cromogênica de RNA

Resumo

Fonte: Outh-Gauer, S. et al. Hibridização In Situ Cromogênica como Ferramenta para o Diagnóstico de Câncer de Cabeça e Pescoço Relacionado ao HPV. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra as etapas envolvidas no pré-tratamento de amostras de tecido FFPE para hibridização in situ cromogênica de RNA. O processo de pré-tratamento ajuda a manter a integridade do ácido nucleico dentro das células e a morfologia geral do tecido.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo participantes humanos foram realizados em conformidade com as diretrizes institucionais, nacionais e internacionais para o bem-estar humano e foram revisados pelo conselho de revisão institucional local.

1. Preparação dos Materiais

1. Preparação de 1x reagente de recuperação de alvo
   1. Em um béquer grande, adicione 70 mL de reagente de recuperação alvo 10x (consulte a Tabela de Materiais) a 630 mL de água destilada.
   2. Coloque o copo sobre uma placa de aquecimento com um agitador magnético. Cubra-o com papel alumínio.
   3. Fe....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Forno HybEZ (110v)	Diagnóstico Celular Avançado Inc.	Rolamento 321710
Rack de slides HybEZ	Diagnóstico Celular Avançado Inc.	300104
Caneta de barreira hidrofóbica ImmEdge	Diagnóstico Celular Avançado Inc.	310018
RNAscope H202 & Reagente Protease Plus	Diagnóstico Celular Avançado Inc.	Rolamento 322330	Peróxido de hidrogênio x2 e Protease Plus x 1
Reagentes de recuperação de alvos de RNAscope	Diagnóstico Celular Avançado Inc.	Rolamento 322000