Colheita de membrana corioalantóide de pintinho: um método para isolar a membrana corioalantóide com enxerto tumoral de ovo de galinha

Neste artigo

Resumo

Fonte: Schmidt, L. B. et al. O modelo in vivo da membrana corioalantóide de pintinho para avaliar a invasão perineural no câncer de cabeça e pescoço. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra o isolamento da membrana corioalantóide portadora de tumor do embrião de galinha. O CAM colhido pode ser usado para outras aplicações a jusante.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Colhendo o CAM

Prepare placas de 6 poços com 4% de PFA (paraformaldeído) pH 7,0; um poço por ovo, 2 mL por poço.
Leve os ovos para uma bancada de laboratório. Usando uma agulha acoplada a uma seringa para perfurar o curativo do filme, coloque cerca de 300 μL de PFA sobre o CAM para endurecer levemente o CAM, facilitando assim o processo de colheita. Repita isso para todos os ovos.
Com uma tesoura, remova a metade superior da casca do ovo (onde está localizada a janela de operação) com o CAM conectado a ela (Figura 1I). Reduza o tamanho desta metade para aproximadamente 3 cm de diâmetro. Segure o CAM com uma pinça fina e retire-o da casca do ovo enquanto o coloca no PFA.

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Resultados

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Figura 1: Enxertia de DRG, células e coleta de CAM: No dia 8: A. CAM facilmente observada após a remoção da membrana de cera de parafina. B-C. Com uma pinça fina, o DRG é colocado no CAM. O ovo é coberto com molho de filme e colocado na incubadora; As setas apontam para as aberturas que estão cobertas. No dia 10: E-F. O curativo de filme ...