Inoculação ortotópica de células de câncer de tireoide em tireoide murina: um procedimento para estabelecer o modelo ortotópico de camundongo com câncer de tireoide

Resumo

Fonte: Julia Ramirez-Moya, et al. Inibição in vivo de microRNA para diminuir o crescimento tumoral em camundongos. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo descreve o procedimento de inoculação ortotópica de células de câncer de tireoide na glândula tireoide de modelos de camundongos, que pode servir como uma plataforma valiosa para avaliar a carcinogênese e descobrir possíveis estratégias de tratamento.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Inoculação ortotópica de células da tireoide

1. Preparação celular
   1. Projete uma linha celular de câncer de tireoide humano Cal62 para superexpressar uma construção transgênica que expressa constitutivamente GFP e luciferase. Selecione as células transgênicas por resistência a antibióticos ou classificando as células GFP-positivas com citometria de fluxo.
   2. Cultive essas células em DMEM suplementado com antibióticos (penicilina e estreptomicina) e 10% de FBS a 37 ° C e 5% de CO₂.
   3. Suspenda 1 x 10⁵ células em 5 μL de PBS.
2. Inoculação celular na glândula tireoide de camundongos
   1. Injete 100 μL de analgésico (buprenorfina) e 100 μL de antibiótico (cefalosporina) por via subcutânea em camundongos BALB/c nu/nu com 7 semanas de idade. Desinfete o local da injeção com álcool.
   2. Injete 5 μL da solução celular na glândula tireoide dos camundongos.
      1. Anestesiar o camundongo com isoflurano a 3% misturado com oxigênio e colocá-lo sob um microscópio estereoscópico em um gabinete de fluxo estéril. Avalie o nível de anestesia por reflexo pedal (pinça firme do dedo do pé) e ajuste a administração do anestésico conforme apropriado para manter o plano cirúrgico.
      2. Aplique pomada oftálmica em ambos os olhos para evitar a dessecação.
      3. Para cada camundongo, desinfete o pescoço com iodopovidona e faça uma incisão de aproximadamente 2 cm na pele com uma tesoura. Uma vez aberto, exponha o pescoço deslocando as glândulas salivares.
      4. Disseque os músculos da cinta usando uma pinça de dissecção e/ou tesoura para expor a traqueia e a glândula tireoide. Usando uma seringa de 10 μL, injete 5 μL da solução celular no lóbulo tireoidiano direito, localizado ao lado da cartilagem cricóide.
      5. Reposicione as glândulas salivares e suture a incisão com seda usando suturas trançadas, revestidas e não absorvíveis.
      6. Adicione iodopovidona à área da ferida e coloque o camundongo em um cobertor térmico enquanto ele se recupera da anestesia.
   3. No dia seguinte após a cirurgia, injete analgésico subcutâneo (buprenorfina) e adicione 3 mL de ibuprofeno líquido (40 mg / mL) em 250 mL de água potável por 1 semana.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Matriz de Membrana Basal: Matriz de Membrana Basal Matrigel Alta Concentração	Corning	#354248
Reagente de entrega in vivo: Reagente Invivofectamine 3.0	Thermo Fisher	IVF3005
Software de imagem in vivo: IVIS-Lumina II Imaging System	Caliper Ciências da Vida