Incorporação de esferoides 3D em gotas de gel de agarose: uma técnica para preservar esferoides para análise a jusante

Neste artigo

Resumo

Fonte: Rolver, M. G. et al. Avaliando a viabilidade e morte celular em culturas esferóides 3D de células cancerígenas. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo descreve a técnica para incorporar esferoides 3D em gotas de gel de agarose para preservação. Os esferoides 3D incorporados podem ser usados posteriormente para análise a jusante.

Protocolo

1. Incorporação de esferoides 3D

Prepare o gel de agarose no qual os esferóides são incorporados (necessário apenas na primeira vez que executar o protocolo)
1. Misture 1 g de bacto-ágar em 50 mL de ddH₂O.
2. Aqueça lentamente no forno de micro-ondas até que o bacto-ágar se dissolva e um gel homogêneo se forme. Não deixe o gel ferver.
3. Manter o bacto-ágar quente em banho-maria a 60 °C.
4. Conservar a 4 °C entre as experiências.
Incorporação de esferoides
1. No dia 1, para cada condição, agrupe um mínimo de 12 esferoides em um tubo de 1,5 mL.
2. Lave uma vez com 1 m....

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Resultados

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Figura 1: Fixação, incorporação e análise imuno-histoquímica de esferoides. (A) Representação esquemática do protocolo de incorporação de esferoides. As etapas individuais são marcadas como (i-vii). (B) Imagem do esferóide MDA-MB-231 incorporado. Barra de escala: 50 μm. (C) Imagem representativa do esferóide MDA-MB-231 tr.......