Artigo de método

Isolamento de capilares cerebrais do cérebro humano: um método otimizado para extrair capilares cerebrais do tecido cerebral humano

8 de julho de 2025

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Hartz, A. M. S. et al. Isolamento de capilares cerebrais de tecido cerebral humano fresco. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo apresenta o isolamento dos capilares cerebrais de um tecido cerebral humano fresco. Os capilares isolados podem então ser usados para gerar um modelo de barreira hematoencefálica ex vivo.

Protocolo

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Todos os procedimentos envolvendo participantes humanos foram realizados em conformidade com as diretrizes institucionais, nacionais e internacionais para o bem-estar humano e foram revisados pelo conselho de revisão institucional local.

1. Preparação de amostras cerebrais

NOTA: A Figura 1A mostra o gráfico de fluxo de trabalho de todo o procedimento de isolamento descrito abaixo. O tecido cerebral humano pode se originar de qualquer parte do córtex e pode ser usado fresco ou congelado. O tecido cerebral congelado pode ser descongelado à temperatura ambiente (sem t....

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Resultados

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Figura 1: Fluxograma para isolamento capilar. (A) O pictograma ilustra as principais etapas do procedimento para isolar os capilares cerebrais do tecido humano fresco. (B) A imagem mostra capilares cerebrais humanos isolados sob um microscópio de luz diretamente após o isolamento (ampliação de 100X).

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Equipamento de Proteção Individual (EPI)
Luvas de látex Diamond Grip Plus, Microflex MédioVWR, Radnor, Pensilvânia, EUARolamento 32916-636Ppe
Jalecos de proteção descartáveisVWR, Radnor, Pensilvânia, EUARolamento 470146-214EPI; devido à natureza do material de origem humana, recomenda-se o uso de jaleco descartável
Protetor facial, descartávelThermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUA19460102EPI; devido à natureza do material de origem humana, recomenda-se o uso de um protetor facial descartável
Materiais de segurança
Sacos de autoclave de alta temperatura Clavies 8 x 12Thermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUA01-815-6
Papel de Bancada Versi Dry 18" x 20"Thermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUA14-206-32Para cobrir áreas de trabalho
Sistemas de contentores para objetos cortantes da VWRThermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUARolamento 75800-272Para bisturis usados
Alvejante 8.2% Clorox Germicida 64 oz.Centro de Suprimentos do Reino Unido, Lexington, KY, EUA323775
Equipamento
Geladeira 4 °CThermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUA13-986-148
Medidor de pH Accume BASIC AB15Thermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUAAB15
Controle Heidolph RZR 2102Heidolph, Elk Grove Village, IL, EUARolamento 501-21024-01-3
Centrífuga Sorvall LEGEND XTRThermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUA75004521
Microscópio de dissecação Leica L2Leica Microsystems Inc, Buffalo Grove IL, EUAUsado para remover meninges
Homogeneizador POLYTRON PT2500Kinematica AG, Lucerna, Suíça9158168
Balança P-403Denver Instrument, Bohemia, NY, EUA191392
Mini Stir padrãoThermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUA1151050
Frascos Térmicos de Nitrogênio Líquido DewarThermal Scientific, Mansfiled, TX, EUA11-670-4CUsado para congelar o tecido
Balança Analítica Voyager ProOHAUS, Parsippany, Nova Jérsia, EUAVP214CN
Microcopa ZEISS AxiovertCarl Zeiss, Inc Thornwood, NY, EUAUsado para verificar capilares isolados
Ferramentas e Artigos de Vidro
Pipeta Finnpipette II 1-5 mLThermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUARolamento 21377823T1Lave os capilares do filtro
Pipeta Finnpipette II 100-1.000 μLThermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUARolamento 21377821T1Ressuspender o pellet em BSA
Menino PipetIntegra, Hudson, NH, EUA739658
Tubos Falcon de 50 mL 25/rack - 500/csVWR, Radnor, Pensilvânia, EUA21008-951
Lâminas de bisturi EISCOThermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUAS95938CPara picar o tecido cerebral
PARAFILMEVWR, Radnor, Pensilvânia, EUARolamento 52858-000Para cobrir o béquer e o balão volumétrico
Ponteiras de Pipeta Finntip da Thermo Scientific 5 mLThermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUA21-377-304Para lavar os capilares do filtro
Seringa de 60 mL com Luer-LokThermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUABD309653Usado com anel conector para filtrar capilares
Cabo de bisturi # 4Ferramentas de Belas Ciências, Foster City, CA, EUA10060-13Usado para picar
Fórceps Dumont #5Ferramentas de Belas Ciências, Foster City, CA, EUA11251-10Usado para remover meninges
Moedor de Tecidos Potter-ElvehjemThomas Scientific, Swedesboro, NJ, EUA3.43E+28Volume de 50 mL, depuração: 150-230 μm
Homogeneizador DounceVWR, Radnor, PA, EUANº 62400-642Volume de 15 mL, depuração: 80-130 μm
Filtros Spectra/Mesh Woven (300 μm)Laboratórios Spectrum, Rancho Dominguez, CA, EUA146424Usado para filtrar a suspensão capilar para remover quaisquer meninges que possam ser deixadas
pluriFiltros (tamanho do poro: 30 μm)pluriSelect Ciências da Vida, Leipzig, AlemanhaTelefone: 43-50030-03
Anel ConectorpluriSelect Ciências da Vida, Leipzig, Alemanha41-50000-03Reutilizar várias vezes
Balão volumétrico de 1 LPara preparação do Buffer de Isolamento
Copo de 1 LPara preparação de 1% BSA
Barra de agitaçãoPara preparação de 1% BSA e Ficoll®
Garrafa Schott (60 mL)Para preparação de Ficoll®
Balde de geloPara manter tudo frio
Placa de Petri de 100 mmPara picar o tecido cerebral
Raspador de células de cultura de tecidosVWR, Radnor, Pensilvânia, EUARolamento 89260-222Para remover o sobrenadante após centrifugação
Produtos químicos
BSA Fração V, A-9647Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUAA9647-500gPrepare em DPBS com Ca2+ & Mg2+ no dia anterior. Evite bolhas durante o preparo. Guarde na geladeira. Mexa lentamente por 10 minutos antes de usar.
DPBS com Ca2+ & Mg2+HycloneSH30264.FSDPBS - parte do buffer de isolamento
Ficoll PM400Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUAF4375A medição exata é importante aqui. Pese em garrafa com barra de agitação. Agite vigorosamente após adicionar DPBS. Mantenha na geladeira O/N. Ficará claro pela manhã. Mexa delicadamente por 10-15 min antes de usar. Mantenha no gelo até o uso.
Glicose (D-(+) Dextrose)Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUAG7528Concentração de glicose (D-(+) Dextrose): 5 mM
Solução padrão de hidróxido de sódioSigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUARolamento 71474Para ajustar o pH do DPBS
Piruvato de sódioSigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUAPág. 2256Concentração: 1 mM

Reimpressões e permissões

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Etiquetas

Cerebral CapillariesHuman Brain TissueDensity Gradient CentrifugationFiltration MethodBSA Supplemented BufferCapillary Isolation ProtocolBlood Brain Barrier ModelTissue HomogenizationMicroscopic AnalysisCapillary Purity Assessment

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