Modelo de camundongo com metástase cerebral: um método para gerar o modelo de camundongo com metástase cerebral por injeção intracarotídea de células cancerígenas

Resumo

Fonte: Zhang, C. et al. Injeção de células cancerígenas intracarotídeas para produzir modelos de metástase cerebral em camundongos. J. Vis. Exp. (2017)

Este vídeo demonstra o estabelecimento de um modelo de camundongo com metástase cerebral por injeção intracarotídea de células cancerígenas marcadas com fluorescência. O modelo de camundongo pode ser usado para estudar os efeitos de novas terapêuticas e os mecanismos fisiológicos subjacentes.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Prepare camundongos para injeção de células tumorais

1. Anestesiar um camundongo por injeção intraperitoneal (i.p.) de coquetel de cetamina / xilazina (cetamina 100 mg / kg, xilazina 10 mg / kg).
2. Confirme a anestesia completa beliscando os pés do animal e observe a falta de resposta.
3. Coloque o mouse em uma placa de vidro (usada para fundir géis de proteína) e prenda com elásticos.
4. Se necessário, remova os pelos do pescoço raspando ou aplicando uma pequena quantidade de produto depilatório e limpando os pelos com papel toalha.
   nota: Se estiver usando ratos nus, pule esta etapa, pois eles não têm pelos no corpo.
5. Limpe a pele do pescoço aplicando iodopovidona e álcool 70%.
6. Coloque o mouse no palco do microscópio de dissecação
7. Faça uma incisão na pele com ~ 1 cm de comprimento com um bisturi cirúrgico.
8. Disseque o músculo sem corte com uma pinça dentada para expor a artéria carótida por baixo.
9. Separe a artéria carótida do nervo vago adjacente com uma pinça cirúrgica.
10. Usando uma pinça cirúrgica, separe um pouco de algodão de uma bola de algodão, umedeça e molde em uma bola de algodão menor. Coloque esta bola de algodão hidratada com tampão embaixo da artéria carótida do local pretendido da injeção.
11. Coloque uma sutura distal e proximal à bola de algodão e faça nós soltos. Aperte o nó proximal para bloquear o fluxo sanguíneo para o local da injeção.
12. Prossiga para a injeção de células cancerígenas se a artéria carótida na bola de algodão parecer totalmente pressurizada com sangue vermelho fresco.

2. Injeção de células cancerígenas na artéria carótida

1. Vórtice e atraia 100 μL de células cancerígenas para a seringa.
2. Sob o microscópio de dissecação, insira lentamente a agulha 31G (com o chanfro para cima) no lúmen da artéria carótida em cima da bola de algodão.
3. Injete lentamente as células da seringa na artéria carótida. A injeção bem-sucedida pode ser observada ao microscópio pela mudança de cor dos vasos sanguíneos e musculatura próximos quando as células cancerígenas tamponadas são empurradas para a circulação.
4. Quando a injeção de todo o volume estiver completa, levante a artéria carótida distal suavemente para evitar regurgitação.
5. Aperte rapidamente o nó distal para concluir o processo de injeção.
6. Depois de completar a injeção, aperte as ligaduras e apare o excesso de sutura de seda com uma microtesoura sob o microscópio de dissecação. Mova para trás o músculo separado para cobrir o local da ferida. Feche a pele com dois grampos.

3. Recuperação Cirúrgica

1. Mova o animal operado para uma almofada de aquecimento para recuperação. Pode levar de 30 a 60 minutos para os animais recuperarem a consciência. Enquanto isso, administre buprenorfina (0,05 mg / kg) por injeção subcutânea como analgesia pós-cirúrgica.
   nota: A analgesia deve ser fornecida de acordo com o protocolo local aprovado pela IACUC.
2. Assim que os animais despertarem e retomarem seu comportamento normal, devolva os ratos ao local de alojamento. Forneça aos camundongos comida em gel por vários dias após a cirurgia. Mantenha um registro cirúrgico e mantenha-o na sala.

4. Imagem In Vivo Não Invasiva

1. Para células marcadas com construções repórter de luciferase, meça a eficiência da injeção de células cancerígenas usando o sistema de imagem in vivo.
   nota: A imagem não é realizada no dia da injeção para evitar estresse excessivo aos animais de pesquisa.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Solução de cloridrato de cetamina/cloridrato de xilazina	Sigma-Aldrich	K113
Estereomicroscópio de rotina Leica M50	Leica	M50	O microscópio é modular e altamente configurável para atender a requisitos de espaço específicos
Scapel descartável cirúrgico	Integra Miltex	4-410	Para fazer incisões na pele
Fórceps de Tecido - 1 x 2 Dentes	Ferramentas de Belas Ciências	11021-12	Para dissecar sem rodeios os músculos
Dumont #5 - Pinça de Acabamento Espelhado	Ferramentas de Belas Ciências	11252-23	Para separar e preparar a artéria carótida para injeção
Tesoura de mola	Ferramentas de Belas Ciências	15025-10	Para cortar suturas
Kit de clipe EZ	Stoelting	Rolamento 59020	Para fechamento de feridas
Seringa de insulina BD	Becton Dickinson	328438	Para injeção de células
Sistema de imagem in vivo IVIS Spectrum	PerkinElmer	124262