Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Anestesia e Canulação Traqueal
- Pese o mouse para determinar a dosagem de drogas anestésicas, medicação analgésica pós-operatória e volume corrente do ventilador. Pré-aqueça a almofada de aquecimento a 37 °C. A configuração cirúrgica está representada na Figura 1.
- Injete no camundongo por via intraperitoneal uma mistura de cetamina e xilazina na dose de 80 mg / kg e 10 mg / kg, respectivamente.
- Raspe rapidamente o pelo do rato na garganta e no lado esquerdo da caixa torácica usando um barbeador elétrico.
- Verifique a profundidade da anestesia beliscando a cauda e/ou as patas traseiras e acomode o animal em decúbito dorsal na almofada de aquecimento. Coloque uma pequena compressa de gaze sob a cabeça do animal para evitar o superaquecimento dos olhos. Aplique gel ocular para evitar o ressecamento dos olhos.
- Prenda os quatro membros com fita adesiva na superfície da almofada de aquecimento. Passe um laço de sutura de seda 5-0 sob os incisivos superiores e cole a extremidade do laço com fita adesiva na almofada de aquecimento. Isso manterá a boca do animal aberta e facilitará a canulação.
- Aplique o creme depilatório nas áreas pré-depiladas e massageie suavemente com um cotonete por 1 min. Limpe o excesso de pelo e creme com uma gaze. Use gotas de soro fisiológico a 0,9% e gaze para limpar as áreas da incisão. Aplique pedaços de gaze estéril na garganta e tórax raspados e mergulhe-os em iodopovidona.
nota: Recomenda-se a aplicação de um anestésico local (lidocaína ou bupivacaína) nos locais das incisões.
- Ajuste o ventilador em um volume corrente de 7 mL/kg e taxa de ventilação de 140 golpes/min.
nota: A partir de agora, trabalhe sob um estereomicroscópio de microcirurgia.
- Segure a pele no centro da garganta e faça uma incisão de 0,5 cm seguindo uma linha caudal/cefálica usando uma tesoura pequena. Separe os lobos da glândula salivar e, em seguida, separe suavemente a fáscia do músculo esterno-hióideo com uma pinça de dissecação curva até que a laringe e a traqueia estejam visíveis. Prenda as bordas da abertura com afastadores presos a elásticos.
nota: Faça esta etapa sem incisão dos músculos. Um operador treinado poderá intubar o animal através da cavidade oral sem visualização da traqueia, tornando esta etapa opcional.
- Segure suavemente a língua de lado. Com uma pinça, insira a agulha interna embotada de uma cânula de 16 G na traqueia. Visualize a inserção correta na traqueia através da incisão na garganta.
- Conecte a cânula ao ventilador e garanta a ventilação correta colocando o tubo de exaustão na água. A presença de bolhas indica intubação correta.
nota: Para manter os tecidos úmidos durante a operação, coloque gaze estéril embebida em solução salina a 0,9% e iodopovidona na incisão da garganta. Controle a umidade durante o procedimento.
2. Ligadura da artéria coronária LAD
- Solte a pata anterior esquerda da fita adesiva e mova cuidadosamente o mouse para a posição de decúbito do lado direito. Prenda o membro anterior esquerdo quando o animal estiver na posição correta.
- Identifique a linha entre os músculos peitoral menor esquerdo e maior e faça uma incisão oblíqua na pele em 1 cm com uma tesoura seguindo a linha. Com microtesoura romba dissecante, separe a fáscia dos músculos peitorais sem incisão. Mantenha os músculos peitorais separados com afastadores presos a faixas elásticas.
- Ajuste o ventilador com uma pressão expiratória final positiva (PEEP) de 3 cm H2O.
- Abra a cavidade torácica usando uma pinça romba no 3º espaço intercostal entre a 3ª e a 4ª costelas. Evite tocar na artéria torácica interna, pois há perigo de sangramento. Não toque no coração ou no pulmão. Aplique dois afastadores na caixa torácica, um em cada costela (Figura 2A).
- Com uma pinça fina curva, remova cuidadosamente o pericárdio e separe-o sem prejudicar o coração e os pulmões.
- Localize a artéria coronária descendente anterior esquerda (LAD). A artéria LAD aparece como uma linha vermelha brilhante superficial que vai da borda da aurícula esquerda em direção ao ápice.
- Use um porta-agulha para passar uma sutura de seda 7-0 sob a DA 2 a 3 mm abaixo dos átrios esquerdos. Puxe a seda lentamente para evitar um rasgo do tecido cardíaco. Amarre a ligadura com três nós. A parte inferior esquerda do ventrículo esquerdo ficará instantaneamente pálida após a ligadura (Figura 2B–E).
nota: É importante não se aprofundar muito na cavidade ventricular ou permanecer muito superficial. Para animais operados de forma simulada, puxe a seda da sutura sob a LAD e remova-a lentamente, evitando o rompimento do tecido.
- Solte os afastadores de costela, segure a 3ª costela com uma pinça e faça duas passagens com uma sutura de seda 6-0 sob a 3ª e 4ª costelas.
cuidado: Não perfure o coração ou o pulmão. Não aperte os nós ainda.
- Coloque três gotas de solução salina a 0,9% a 37 °C na abertura e feche o tubo de exaustão de expiração por 2 ou 3 ciclos respiratórios para inflar adequadamente os pulmões. Aperte a sutura e prenda com dois arremessos.
- Solte os afastadores segurando os músculos e ajude-os a recuperar o lugar correto.
- Feche a pele torácica com dois pontos de seda de sutura 5-0 e prenda com dois arremessos. Feche a pele da garganta com um ponto de seda de sutura 5-0 e prenda com dois arremessos.
