Estimulação cerebral Slice Usando uma Rede microfluídicos e da Câmara de Perfusão padrão

Summary

Nós demonstramos a fabricação de um dispositivo simples microfluídicos que podem ser integrados com configurações padrão eletrofisiologia para expor superfícies microescala de uma fatia do cérebro de uma maneira bem controlada para diferentes neurotransmissores.

Abstract

Nós demonstramos a fabricação de um dispositivo de dois níveis microfluídicos que pode ser facilmente integrado com instalações existentes eletrofisiologia. O dispositivo de dois níveis de microfluídica é fabricado usando um padrão de duas etapas negativas resistir ^um processo de litografia. O primeiro nível contém microcanais com admissão e de escape em cada extremidade. O segundo nível contém micro furos circular localizado a meio caminho do comprimento do canal e centrado, juntamente com a largura do canal. Método de bombeamento passivo é usado para bombear fluidos da porta de entrada para a porta de saída ^2. O dispositivo micro é integrada com off-the-shelf câmaras de perfusão e permite uma integração perfeita com a configuração de eletrofisiologia. Os fluidos introduzido no fluxo de portas de entrada através dos microcanais para os portos de saída e também fugir através das aberturas circular localizado na parte superior dos microcanais para o banho da perfusão. Assim, a superfície inferior da fatia do cérebro colocado no banho de câmara de perfusão e acima do dispositivo micro podem ser expostos com diferentes neurotransmissores. A espessura microescala do dispositivo micro ea transparência dos materiais [lamela de vidro e PDMS (polidimetilsiloxano)] usado para fazer o dispositivo micro permitir microscopia da fatia do cérebro. O dispositivo micro permite a modulação (espacial e temporal) dos estímulos químicos introduzidos no microambientes fatia do cérebro.

Protocol

SU-8 de fabricação de moldes

Preparação mestre

1. O mestre SU-8 em silício substrato wafer é preparado usando um dois-passo processo de litografia padrão negativo resistir.
2. As marcas de alinhamento no wafer de silício são removidas utilizando uma lâmina de barbear como a altura destas estruturas (localizado ao longo da periferia do wafer) é mais do que as estruturas dispositivo real.
3. O wafer de silício é então limpo usando álcool isopropílico e seca em um fluxo de N _2. Pilares de sustentação feita de fita com espessura menor do que a mais alta estrutura do dispositivo substituir as marcas de alinhamento....

Discussion

Macroescala existentes ou micro câmaras de perfusão cerebral fatia são limitados em termos da resolução espacial que eles fornecem para expor fatias de cérebro com neurotransmissores. A tecnologia de dispositivos microfluídicos demonstrado aqui supera esta limitação utilizando técnicas simples bioMEMS. Prevê-se que a simplicidade na fabricação do dispositivo micro ea facilidade de integração com as configurações existentes eletrofisiologia permitirá a aplicação generalizada da tecnologia de dispositivos demonstrados. Experiências interessan.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ferramenta RC-26GPL		Warner Instruments	W2-64-0236	Banho Grande de Perfil Baixo RC-26GLP Câmara de Gravação
SHD-26GH/10	Ferramenta	Warner Instruments	W2-64-0253	Fixação de fatia de aço inoxidável para RC-26G, espaçamento de rosca de 1,0 mm
PDMS (polidimetilsiloxano)	Reagente	Dow Corning	Sylgard 184	Kit de Elastômero
de Silicone Plasma Preen-II 862	Ferramenta	Sistemas Plasmáticos, Inc.		Sistema de plasma de microondas
Modelo P-1	Ferramenta	Warner Instruments	W2-64-0277	Série 20 Plataforma Simples, Modelo P-1
Ferramenta SA-NIK		Warner Instruments	W2-64-0291	Adaptador para Nikon Diaphot/TE200/TE2000, SA-NIK
Reagente ACSF (Líquido cefalorraquidiano artificial) oxigenado e aquecido	A composição exata variará com a aplicação