Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE
1. Implantação Cirúrgica do Sistema Telemétrico de Monitoramento de Temperatura
- Ao chegar do fornecedor, deixe os animais descansarem no viveiro por pelo menos 1 semana antes da cirurgia para minimizar o estresse do transporte.
- O grupo abriga os camundongos (máximo de 5 por gaiola de acordo com as diretrizes locais da IACUC) até o dia da cirurgia para implantação do dispositivo telemétrico de temperatura. Aloje-os em gaiolas padrão de 7,25" (L) x 11,75" (L) x 5" (A) contendo cama de espiga de milho. Mantenha o ciclo de luz em um ciclo de luz de 12 x 12 (ligado: 7 AM; desligado: 7 PM). Mantenha a temperatura da carcaça em 20–22 °C e a umidade relativa (UR) em 30%–60%. Fornecer a dieta padrão de ração e água ad libitum até o protocolo de EHS.
nota: A justificativa para o alojamento individual é evitar lesões frequentes em camundongos C57bl / 6J machos e fornecer ampla oportunidade para corrida espontânea de roda para cada camundongo.
- Para a colocação dos dispositivos de telemetria, anestesiar o camundongo com isoflurano (4%, 0,4–0,6 L/min de fluxo de O2) em uma câmara de indução. Em seguida, coloque o camundongo sob anestesia contínua por meio de um cone nasal (1,5%, 0,6 L / min).
- Use lubrificante para os olhos, como uma pomada veterinária, para proteger os olhos do animal de danos ou ferimentos durante a cirurgia.
- Para preparar o local da cirurgia, raspe a parte inferior do abdômen com uma máquina de cortar pêlos de pequenos animais ou use um removedor de pêlos disponível comercialmente. Administre a primeira dose de buprenorfina subcutânea (0,1 mg/kg) durante este período.
- Esfregue a área com três lavagens de iodopovidona (ou esfoliante germicida semelhante) seguidas de enxágue com álcool isopropílico a 70% (ou solução salina estéril, dependendo dos requisitos veterinários locais). Em seguida, transfira o mouse para a área cirúrgica.
- Use uma cortina adesiva para isolar o local cirúrgico no mouse. Usando instrumentos estéreis e técnica asséptica, faça uma incisão de ~ 1 cm na linha média ao longo da linha alba, a cerca de 0,5 cm da margem costal. Em seguida, separe a pele da camada muscular e faça uma incisão um pouco menor na linha alba, com cuidado para não danificar os intestinos ou órgãos internos.
- Uma vez aberta a camada muscular, coloque o telémetro estéril (dispositivo de radiotelemetria miniatura reutilizável sem bateria; 16,5 x 6,5 mm) na cavidade intraperitoneal na frente das artérias e veias caudais e dorsal aos órgãos digestivos para permitir que ele flutue livremente.
nota: Todos os telémetros são limpos com água e sabão, bem enxaguados e esterilizados a gás com óxido de etileno entre os usos. Se a esterilização por gás não estiver disponível, a imersão em soluções de esterilização (seguindo a recomendação do fabricante para diluição e tempo de imersão) é aceita para desinfetar e esterilizar os telémetros.
- Feche a abertura abdominal com uma sutura absorvível 5-0 estéril e feche a pele com um ponto simples interrompido com sutura de prolina 5-0.
nota: Permitir que o telémetro flutue no compartimento abdominal sem amarrá-lo à parede abdominal (método recomendado pelo fabricante) demonstrou ser bem-sucedido e preferido pelos autores para eliminar o excesso de tensão na parede abdominal durante a cicatrização. Além disso, isso não tem impacto na capacidade do receptor de obter o sinal do emissor.
- Coloque o mouse em sua gaiola limpa com uma almofada de aquecimento portátil sob a gaiola. Monitore o mouse a cada 15 minutos durante a primeira hora de recuperação da anestesia e, em seguida, retorne ao alojamento dos animais.
