$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Laparotomia
- Anestesiar os animais com xilazina (10 mg/kg) e solução de cetamina (80 mg/kg), por via subcutânea (0,1 mL/10g de peso corporal) utilizando seringa de 1 mL e agulha 13 x 0,45 mm 26 G 1/2. Verifique se há profundidade de anestesia suficiente beliscando o dedo do pé. Controle a temperatura corporal usando almofadas aquecidas. Certifique-se de que todos os materiais cirúrgicos sejam estéreis.
- Limpe a área abdominal com solução de iodopovidona a 5% e use um aparador para remover os pelos entre o tórax e a parte inferior do abdômen (aproximadamente 2 cm2). Limpe a área cirúrgica com álcool 70%.
- Imobilize o animal na prancha cirúrgica usando fita cirúrgica. Use uma tesoura para cortar 5 mm da pele horizontalmente, na parte superior do abdômen e 1 cm abaixo do processo xifóide. Repita o corte no peritônio. Isso resultará em uma laparotomia com exposição mínima da cavidade.
2. Localizando e expondo o pâncreas
- Com a ajuda de um afastador, puxe o fígado em direção à cabeça do camundongo, ~ 1 cm do intestino.
- Localize a região do pâncreas que será injetada com taurocolato de sódio (cabeça do pâncreas). Localize o duodeno com referência ao fígado - abaixo do fígado, no lado direito (à esquerda quando o mouse é visto). O duodeno é a primeira parte do intestino delgado e está conectado à porção final do estômago.
- Com a ajuda de uma pinça, levante o fígado em direção à cabeça do animal e puxe suavemente a porção do intestino delgado. Fixe as duas extremidades laterais do intestino delgado com uma sutura de polipropileno 6-0 para visualizar melhor a porção distal do ducto colédoco.
3. Indução de Pancreatite Aguda Grave
- Oclua temporariamente o ducto colédoco proximal com um clipe de microvasos para evitar que a infusão retrógrada vaze para o fígado. O ducto colédoco pode ser visto no lado do fígado do duodeno e sua junção com o duodeno aparecerá branca. Exponha o órgão para fora da cavidade abdominal.
- Puncione a região periampular (parte esbranquiçada da parede do intestino delgado) para acessar o ducto colédoco com uma agulha de 0,4 mm conectada a um tubo de polietileno de 0,54 mm.
- Faça uma oclusão temporária do ducto colédoco distal com 8-0 sutura para evitar que a solução de taurocolato de sódio vaze para o duodeno.
- Inicie a bomba de perfusão e programe uma perfusão de solução de taurocolato de sódio a 2,5% (diluída em solução salina a 0,9%) a uma velocidade constante de 10 μL/10 g de peso corporal durante 3 min.
- Após a infusão, remova o clipe de microvasos, o 8-0 temporário sutura e a agulha de injeção do ducto pancreático biliar para reconstituir o fluxo fisiológico da bile.
- Ao final, suturar o abdômen com fio de polipropileno monofilamentar não absorvente 6-0. O tempo entre a laparotomia e a sutura final deve ser de no máximo 30 min (ver Figura 1).
- Após a cirurgia, alojar os animais em caixas de polietileno forradas com maravalha e água e comida ad libitum.
- Trate os camundongos de controle da mesma maneira que os camundongos experimentais, mas certifique-se de que o infundido consiste apenas em solução salina. Realizar o procedimento cirúrgico e a infusão de soro fisiológico (10 mL/min, por 3 min) em grupo controle (SHAM) para eliminar o viés inflamatório causado pela cirurgia e canulação.
- Utilizar tramadol 12,5 mg/kg por via subcutânea a cada 8 horas, iniciando após a recuperação pós-cirúrgica.
