Modelo de pancreatite biliar aguda: um método para gerar modelo de camundongo com pancreatite biliar aguda por meio de infusão de ducto pancreático

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Laparotomia

1. Anestesiar os animais com xilazina (10 mg/kg) e solução de cetamina (80 mg/kg), por via subcutânea (0,1 mL/10g de peso corporal) utilizando seringa de 1 mL e agulha 13 x 0,45 mm 26 G 1/2. Verifique se há profundidade de anestesia suficiente beliscando o dedo do pé. Controle a temperatura corporal usando almofadas aquecidas. Certifique-se de que todos os materiais cirúrgicos sejam estéreis.
2. Limpe a área abdominal com solução de iodopovidona a 5% e use um aparador para remover os pelos entre o tórax e a parte inferior do abdômen (aproximadamente 2 cm²). Limpe a área cirúrgica com álcool 70%.
3. Imobilize o animal na prancha cirúrgica usando fita cirúrgica. Use uma tesoura para cortar 5 mm da pele horizontalmente, na parte superior do abdômen e 1 cm abaixo do processo xifóide. Repita o corte no peritônio. Isso resultará em uma laparotomia com exposição mínima da cavidade.

2. Localizando e expondo o pâncreas

1. Com a ajuda de um afastador, puxe o fígado em direção à cabeça do camundongo, ~ 1 cm do intestino.
2. Localize a região do pâncreas que será injetada com taurocolato de sódio (cabeça do pâncreas). Localize o duodeno com referência ao fígado - abaixo do fígado, no lado direito (à esquerda quando o mouse é visto). O duodeno é a primeira parte do intestino delgado e está conectado à porção final do estômago.
3. Com a ajuda de uma pinça, levante o fígado em direção à cabeça do animal e puxe suavemente a porção do intestino delgado. Fixe as duas extremidades laterais do intestino delgado com uma sutura de polipropileno 6-0 para visualizar melhor a porção distal do ducto colédoco.

3. Indução de Pancreatite Aguda Grave

1. Oclua temporariamente o ducto colédoco proximal com um clipe de microvasos para evitar que a infusão retrógrada vaze para o fígado. O ducto colédoco pode ser visto no lado do fígado do duodeno e sua junção com o duodeno aparecerá branca. Exponha o órgão para fora da cavidade abdominal.
2. Puncione a região periampular (parte esbranquiçada da parede do intestino delgado) para acessar o ducto colédoco com uma agulha de 0,4 mm conectada a um tubo de polietileno de 0,54 mm.
3. Faça uma oclusão temporária do ducto colédoco distal com 8-0 sutura para evitar que a solução de taurocolato de sódio vaze para o duodeno.
4. Inicie a bomba de perfusão e programe uma perfusão de solução de taurocolato de sódio a 2,5% (diluída em solução salina a 0,9%) a uma velocidade constante de 10 μL/10 g de peso corporal durante 3 min.
5. Após a infusão, remova o clipe de microvasos, o 8-0 temporário sutura e a agulha de injeção do ducto pancreático biliar para reconstituir o fluxo fisiológico da bile.
6. Ao final, suturar o abdômen com fio de polipropileno monofilamentar não absorvente 6-0. O tempo entre a laparotomia e a sutura final deve ser de no máximo 30 min (ver Figura 1).
7. Após a cirurgia, alojar os animais em caixas de polietileno forradas com maravalha e água e comida ad libitum.
8. Trate os camundongos de controle da mesma maneira que os camundongos experimentais, mas certifique-se de que o infundido consiste apenas em solução salina. Realizar o procedimento cirúrgico e a infusão de soro fisiológico (10 mL/min, por 3 min) em grupo controle (SHAM) para eliminar o viés inflamatório causado pela cirurgia e canulação.
9. Utilizar tramadol 12,5 mg/kg por via subcutânea a cada 8 horas, iniciando após a recuperação pós-cirúrgica.

Figura 1: Esquemas de indução de pancreatite aguda grave por taurocolato de sódio a 2,5% em camundongos C57BL/6. (A) vesícula biliar; (B) ducto colédoco; (C) ducto pancreático; (D) veia porta; (E) clipe de microvaso; (F) local da punção (agulha acoplada a um tubo de polietileno e conectada à bomba de infusão); (G) fixação temporária da agulha no ducto colédoco.