Bandagem do Arco Aórtico Transverso em Modelo de Camundongo: Uma Técnica Minimamente Invasiva em Camundongos para Indução de Alta Pressão no Ventrículo Esquerdo

Resumo

Fonte: Zaw, A. M. et al. Constrição aórtica transversa minimamente invasiva em camundongos. J. Vis. Exp. (2017)

Neste vídeo, demonstramos um protocolo experimental para constrição aórtica transversa minimamente invasiva em camundongos para examinar a insuficiência cardíaca induzida por sobrecarga de pressão.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação do Local de Operação

1. Desinfete o local da operação com álcool isopropílico 75%. Ajuste a temperatura da almofada de aquecimento para 37 °C para evitar alterações nas frequências cardíaca e respiratória do animal em questão.
2. Use instrumentos cirúrgicos esterilizados em um esterilizador de deslocamento por gravidade a 121 ° C por 30 min ou por outros métodos apropriados.
3. Pegue 2 a 4 agulhas de calibre 30 e curve-as com um porta-agulhas, como visto na Figura 1, para fazer uma ferramenta para ligadura e separação de tecidos e para uso como retrator. Monte a agulha agora curva em um aplicador de algodão para uso em cirurgia.
4. Levante uma agulha de calibre 27 e curve-a 90º com o porta-agulha. Alise a ponta esfregando uma superfície dura para fazer um espaçador de 0,4 mm na etapa de ligadura.

2. Preparação Animal

1. Anestesie um camundongo C57BL / 6N de 2 meses de idade, macho, 22–25 g com uma mistura apropriada de cetamina e xilazina em relação ao peso corporal: 100 mg / kg + 10 mg / kg i.p. Confirme a anestesia com o reflexo negativo de pinça da cauda.
2. Remova os pelos da região anterior do pescoço e do peito com uma aplicação de 2 a 3 min de creme depilatório. Retire o creme com água morna e um aplicador de algodão.
3. Aplique pomada ou gel oftálmico nos olhos do animal para evitar o ressecamento da córnea.
4. Coloque o animal em uma almofada de aquecimento em decúbito dorsal e realize o monitoramento intraoperatório, certificando-se de manter a documentação apropriada a cada intervalo de 15 minutos.
5. Use fita de papel cirúrgico para prender os membros à almofada de aquecimento, a fim de manter o animal na posição correta durante a cirurgia.
6. Desinfete a pele alternadamente com álcool e solução de iodopovidona três vezes.
7. Use uma cortina estéril com um campo de operação exposto para evitar contaminação. Use luvas estéreis novas para cada mouse e conforme necessário.

3. Procedimento de ligadura

1. Abra a pele do camundongo na posição da linha média do pescoço e do peito com um bisturi.
2. Puxe a glândula tireoide em direção à cabeça, separando suavemente os tecidos conjuntivos com uma tesoura romba.
3. Separe a camada muscular da traqueia na linha média em ambos os lados com as agulhas curvas.
4. Usando a tesoura romba, corte o esterno até a segunda costela (aproximadamente 5 mm). Abra o corte com um retrator ou pinça curva.
5. Separe os lobos do timo um do outro e da parede torácica inferior, separando o tecido conjuntivo com a agulha curva; o arco aórtico transverso e duas artérias carótidas serão claramente visíveis neste ponto.
6. Coloque a agulha curva sob o arco e perfure entre a parede do vaso e o tecido conjuntivo do outro lado, empurrando a cabeça curva para fora.
7. Usando a agulha curva, puxe a sutura monofilamentar 6-0 sob o arco aórtico.
8. Coloque o espaçador no laço e fixe a sutura no lugar com um nó duplo. Remova o espaçador com cuidado.
9. Confirme uma constrição bem-sucedida com a posição do nó e corte as extremidades da sutura.
10. Feche a parede torácica usando sutura de seda 6/0 com um padrão de sutura simples interrompido. Feche a pele com uma sutura de monofilamento 6/0 em um padrão de sutura contínua.

4. Cuidados pós-operatórios

1. Aplique solução de iodopovidona no local da sutura e coloque o animal em uma gaiola pré-aquecida para recuperação e monitoramento pós-operatório.
2. Injete buprenorfina (0,05–0,1 mg/kg s.c. a cada 12 h) após o animal ter recuperado a consciência para aliviar a dor e fornecer ao camundongo alimentos macios apropriados.
3. Retorne o animal para uma sala de ciclo claro/escuro de 12 h após a recuperação completa.

Resultados

Figura 1: Processo de formação dos ganchos de agulha desejados dobrando uma ponta de agulha de calibre 30 de 1 pol. (UMA) A ponta original da agulha de 1 pol., calibre 30. (B) Segure a ponta da agulha com o porta-agulha e dobre aproximadamente até a metade de seu comprimento. Dobre a agulha em um laço, usando o porta-agulha e as mãos, conforme nec...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Agulhas de calibre 30 BD de 1 polegada	, Franklin Lakes, NJ 07417, EUA	305128	Curvado como no procedimento e Figura 1
Agulha de calibre 27	BD, Franklin Lakes, NJ 07417, EUA	301629	Faça sem corte e liso para espaçador
6/0 Dafilon	B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Alemanha	C0933066
6/0 Silkam	B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Alemanha	C0762067
Luvas estéreis	A.R. Medicom, Inc (Ásia), Hong Kong
Cotton Applicator	Mannings, Quarry Bay, Hong Kong		Local Shopping Center
Depilatory Cream	Veet (Hong Kong), Kwun Tong, Kowloon, Hong Kong		Local Shopping Center
Lexer-Baby Scissor	FST, British Columbia V7H 0A6, Canadá	14078-10
Íris Curva Fórceps	FST, Colúmbia Britânica V7H 0A6, Canadá	11065-07
Micro Olsen-Hegar Porta-Agulhas	WPI, Sarasota, FL 34240, EUA	501989
Microscópio Estéreo	WPI, Sarasota, FL 34240, EUA	PZMIII-BS
GenTeal Eye Gel	Novartis, East Hanover, NJ 07936, EUA		Almofada
de aquecimento	Kent Scientific Corporation, Torrington, CT 06790, EUA	DCT-20
Fita cirúrgica	Unidade
Laboratório			de Cetamina e Xilazina
Unidade Animal de			Betadine
Buprenorfina	Unidade

de farmácia local Animal de Laboratório Unidade Animal de Laboratório Unidade Animal de Laboratório Animal de Laboratório