Debandação Aórtica Cirúrgica: Um Procedimento para Estudar a Remodelação Reversa do Ventrículo Esquerdo em Modelo Murino de Constrição Aórtica

Resumo

Fonte: Gonçalves-Rodrigues, P. et al. Estudando a remodelação reversa do ventrículo esquerdo por debandação aórtica em roedores. J. Vis. Exp. (2021)

Este vídeo demonstra a técnica de disbandação da aorta, que pode levar ao remodelamento reverso para limitar a progressão para insuficiência cardíaca em um modelo murino. Após a dissolução, uma redução significativa da pós-carga ventricular desencadeia regressão da hipertrofia ventricular e fibrose, causando uma recuperação da função cardíaca.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação e intubação de camundongos

1. Anestesiar camundongos jovens C57B1 / J6 (20-25 g) por inalação de sevoflurano a 8% com 0,5-1,0 L / min 100% O₂ em um tubo cônico.
2. Verifique a profundidade da anestesia usando o reflexo de retirada da pinça do dedo do pé.
3. Coloque o camundongo em decúbito dorsal em uma placa inclinada e prossiga para a intubação orotraqueal.
4. Mova o mouse para a almofada de aquecimento e conecte rapidamente o tubo orotraqueal ao ventilador para iniciar a ventilação mecânica.
5. Ajuste os parâmetros do ventilador para uma frequência de 160 respirações/min e um volume corrente de 10 mL/kg.

2. Preparação para cirurgia (para cirurgias de bandagem e dissolução)

1. Faça a barba e aplique o creme depilatório do decote até o meio do peito dos ratos.
2. Aplique gel oftálmico nos olhos dos animais para evitar o ressecamento da córnea.
3. Coloque uma sonda retal e o oxímetro na pata ou cauda para monitorar a temperatura, a oxigenação do sangue e a frequência cardíaca, respectivamente.
   NOTA: A anestesia induz hipotermia significativa, portanto, é importante manter a temperatura corporal normal durante a cirurgia para evitar uma rápida diminuição da frequência cardíaca.
4. Manter a anestesia com sevoflurano (2,0–3,0%). Verifique o nível correto de anestesia pela falta do reflexo de pinça do dedo do pé.
5. Coloque os camundongos em decúbito lateral direito em uma almofada de aquecimento e prenda os membros ao sistema de retração do fixador magnético com uma fita adesiva para manter o animal na posição correta durante a cirurgia (Figura 1, Figura 2A).
6. Desinfete o peito do rato com álcool a 70% seguido de solução de iodopovidona.

3. Cirurgia de bandagem da aorta ascendente

1. Com uma lâmina descartável, faça uma pequena incisão na pele (~0,5 cm) no lado esquerdo imediatamente abaixo do nível da axila e disseque a pele.
2. Disseque e separe suavemente o músculo peitoral e outras camadas musculares até que as costelas se tornem visíveis. Use pinças finas e evite cortar o músculo.
3. Ao microscópio, identifique os espaços intercostais e abra uma pequena incisão entre o^2º e o^3º espaço intercostal com uma pinça fina.
4. Retraia as costelas colocando o afastador torácico (Figura 1A).
5. Use uma pequena pinça para dissecar e separar suavemente os lobos tímicos até que a aorta ascendente se torne visível.
   nota: Aplicadores de algodão devem ser úteis em caso de sangramento. Solução salina estéril quente deve ser administrada por via subcutânea em caso de sangramento significativo (por exemplo, a artéria mamária).
6. Use uma pequena pinça para dissecar suavemente a aorta.
   NOTA: A aorta é considerada dissecada quando não há gordura ou outras aderências ao seu redor e é possível circundar facilmente o vaso com uma pequena pinça curva.
7. Após a dissecção da aorta, colocar uma ligadura de polipropileno 7-0 ao redor da aorta usando auxiliar de ligadura e pinça curva (Figura 1B).
8. Posicione a agulha embotada de 26 G paralela à aorta (ponta apontada para a cabeça do camundongo) (Figura 1B). Para camundongos pesando 20 a 25 g, esta agulha induz uma constrição aórtica reprodutível de 65 a 70%.
9. Faça 2 nós soltos ao redor da aorta e da agulha 26 G com a ajuda de 2 pinças (Figura 1B).
10. Aperte o 1º nó e, logo em seguida, o^2º nó. Confirme brevemente o posicionamento correto da constrição e remova rapidamente a agulha para restaurar o fluxo sanguíneo aórtico. Por fim, faça um^3º nó (grupo BA).
11. Reposicione o timo e os músculos em sua posição inicial.
12. Realize o procedimento simulado idêntico ao procedimento de constrição, mas mantendo a sutura solta ao redor da aorta (grupo SHAM).
13. Corte as extremidades da sutura e retire o afastador de tórax.
    NOTA: As extremidades curtas da sutura podem aumentar a probabilidade de afrouxamento dos nós com a pressão aórtica, enquanto as extremidades longas tornam o procedimento de dissolução mais arriscado, pois podem ocorrer aderências entre a sutura e o átrio esquerdo.
14. Feche a parede torácica com sutura de polipropileno 6-0 com sutura simples interrompida ou contínua com o menor número de pontos possível. Aperte o último nó torácico com os pulmões inflados no final da inspiração, retirando a saída do ventilador por 2s para inflar novamente os pulmões.
15. Feche a pele com uma sutura de seda/polipropileno 6-0 em um padrão de sutura contínua.
    NOTA: Se um ventilador mais recente for usado, é possível programá-lo para pausar na inspiração (Setup-Advanced-Pause-Inspiration)

4. Cuidados pós-operatórios

1. Aplique a solução de iodopovidona no local da sutura da pele.
2. Para analgesia adequada, administre buprenorfina por via subcutânea 0,1 mg / kg, duas vezes ao dia, até que o animal se recupere totalmente (geralmente 2 a 3 dias após a cirurgia).
3. Injete solução salina estéril por via intraperitoneal para evitar desidratação em caso de sangramento significativo durante a cirurgia.
4. Desligue a anestesia (sem desintubar o rato) e espere até que o animal recupere os reflexos (os movimentos dos bigodes são um sinal de despertar) e comece a respirar espontaneamente.
5. Remova a cânula traqueal.
6. Deixe o animal se recuperar em uma incubadora a 37 °C.
7. Retorne o animal para uma sala de ciclo claro/escuro de 12 h após a recuperação completa.

5. Cirurgia de Debandação Aórtica

1. Sete semanas depois, realizar a debandagem da aorta em metade dos animais BA.
2. Repita todas as etapas 1.1 a 2.6 mencionadas acima.
3. Disseque suavemente os tecidos, aderências e fibrose ao redor da aorta até que sua constrição se torne visível.
4. Disseque cuidadosamente a aorta e separe a sutura da aorta. Corte a sutura com uma tesoura de mola inclinada (Figura 2B).
5. Feche a parede torácica com fio de polipropileno 6-0 com sutura simples interrompida ou contínua com o menor número de pontos possível.
   NOTA: Tente apertar a última sutura torácica quando os pulmões estiverem inflados para evitar pneumotórax.
6. Feche a pele com uma sutura de seda/polipropileno 6-0 em um padrão de sutura contínua.
7. Execute todos os procedimentos de cuidados pós-operatórios conforme mencionado na etapa 4.

Resultados

Figura 1: Procedimento de bandagem aórtica.(A) A abordagem torácica da aorta ascendente realizada com o auxílio de um sistema de retração do fixador magnético (3 afastadores são visíveis). (B) A aorta ascendente é claramente dissecada e visível. A agulha embotada e a sutura de polipropileno 6-0 são colocadas na posição correta para realizar a bandagem...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Lanças de Absorção	F.S.T	18105-03	Para absorver fluidos durante a cirurgia
Lâminas	F.S.T	Rolamento 10011-00	Para realizar a incisão na pele
Buprenorfina	Alívio de Buprelief		Medicamento para analgesia
cotonete	Johnson's		Para absorver fluidos durante a cirurgia
Creme depilatório	Veet		Para delipatar o animal
Tampa de mesa descartável para sala de cirurgia	MEDKINE	DYND4030SB	Para cobrir a área cirúrgica
Monitor de CO2 expirado	Kent Científico	CapnoStat	Para controlar a saturação de gás de expiração
Fórceps/pinças	F.S.T	11255-20	Para dissecar os tecidos e a aorta
Fórceps/pinças	F.S.T	11272-30	Para dissecar os tecidos e a aorta
Fórceps/pinças	F.S.T	11151-10	Para dissecar os tecidos e a aorta
Fórceps/pinças	F.S.T	11152-10	Para dissecar os tecidos e a aorta
Sistema de gás	Penlon Sigma Delta		Para anestesia e ventilação mecânica
Hemostáticos	F.S.T	13010-12	Segurar a sutura antes da aorta
Hemostáticos	F.S.T	13011-13	Segurar a sutura antes da aorta
Auxiliares de ligadura	F.S.T	18062-12	Para colocar uma sutura ao redor da aorta
Afastador magnético	F.S.T	18200-20	Para ajudar a manter o animal em uma posição adequada
Porta-agulhas	F.S.T	12503-15	Para suturar o animal
Agulha 26 g	B-BRAUN	4665457	Para servir como molde de diâmetro de constrição aórtica
oxigénio	Air Liquide		Para anestesia e ventilação mecânica
Sutura de polipropileno	Vycril	W8304/W8597	Suturar o animal e fazer a constrição
Solução de iodopovidona	Betadine®		Anti-séptico para a pele
PowerLab	Instrumentos Millar	ML880 PowerLab 16/30	Aquisição de sinal de loop fotovoltaico
Oxímetro de pulso Kent Scientific	MouseStat		Para controlar a frequência cardíaca e a saturação do sangue
retrator	F.S.T	Rolamento 17000-01	Para fornecer uma melhor visão geral da aorta
Cabo de bisturi	F.S.T	10003-12	Para realizar a incisão na pele
tesoura	F.S.T	15070-08	Para cortar a sutura na cirurgia de debanding
tesoura	F.S.T	14084-09	Para cortar outro material durante a cirurgia, por exemplo, sutura, papeador
Sevoflurano	Baxter	533-CA2L9117
Módulo de controle de temperatura	Kent Científico	Temp Direita	Para controlar a temperatura corporal do animal
Ventilador	Kent Científico	FisioSuite	Para ventilar o animal
Banho-maria	Thermo Científico™	TSGP02	Para manter a temperatura da água adequada para aquecer os catethers de loop PV