Recuperação pré-natal de embriões de camundongos: um procedimento para colher embriões de camundongos prenhes

Resumo

Fonte: Yun, K. Avaliando defeitos de obstrução da junção do trato urinário por injeção de corante azul de metileno. J. Vis. Exp.(2017)

Este vídeo demonstra a recuperação de embriões de uma rata grávida. Os embriões perinatais recuperados podem ser usados como sistemas modelo para estudar o desenvolvimento de mamíferos.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Dissecção de embriões pré-natais

1. Limpe as tesouras e pinças de dissecação com etanol a 70%.
2. Para coletar embriões perinatais em E18.5 ou E19.5, eutanasiar camundongos prenhes primeiro usando inalação de CO₂ e, em seguida, realizar a luxação cervical de acordo com as diretrizes éticas.
   nota: A rata grávida geralmente dá à luz a partir de E18.5, no entanto, rins maiores são mais fáceis de manipular. Portanto, os rins em E19.5 mais próximos do nascimento são mais fáceis de realizar esta análise. No entanto, filhotes com obstruções bilaterais do trato urinário morrem após o nascimento. Dependendo das características dos camundongos experimentais, um dia/hora de coleta apropriado deve ser determinado empiricamente.
3. Pulverize etanol a 70% na superfície abdominal ventral e, em seguida, abra a cavidade abdominal ventralmente usando tesouras de dissecação e pinças.
4. Levante todo o útero e separe-o do corpo cortando com uma tesoura de dissecação as pontas dos cornos uterinos.
5. Enxágue todo o útero com 1x PBS em uma placa de Petri.
6. Corte o útero segmentalmente com uma tesoura de dissecação e remova a decídua placentária com uma pinça de dissecação para expor os embriões em sacos vitelinos.
7. Remova o saco vitelino primeiro e, em seguida, remova a membrana amniótica com uma pinça de dissecação para liberar os embriões perinatais.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tesoura de operação delicada	Roboz Instrumento Cirúrgico Co.	RS-6702
Micro fórceps de dissecação	Roboz Instrumento Cirúrgico Co.	RS-5135
Pinças Dumont; Padrão #5	Roboz Instrumento Cirúrgico Co.	RS-5045
Quality Biological Inc. Solução salina NORMAL - 500ML	Pescadorcientífico	Telefone: 50-983-204