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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Preparação do animal
- Injete analgesia 30 min antes da cirurgia (4 mg/kg de Carprofeno e 0,1 mg/kg de Buprenorfina).
- Registre o peso corporal do camundongo para ajustar a dose de Rose Bengal a ser injetada (10 μL / g, ou seja, 100 μg / g).
- Coloque o camundongo na câmara de indução com uma taxa de fluxo de isoflurano de 4% para anestesiá-lo até que o movimento espontâneo do corpo e as vibrissas parem.
- Transfira o mouse para o quadro estereotáxico e coloque-o em decúbito ventral com o nariz na máscara de anestesia. Fixar o animal e manter a concentração de isoflurano a 4% por 1 min. Em seguida, reduza e mantenha a concentração de isoflurano em 2%.
- Insira suavemente a sonda retal para monitorar a temperatura durante os procedimentos cirúrgicos. Defina a almofada de aquecimento controlada por feedback associada para manter a temperatura corporal do mouse em 37 °C.
- Aplique a pomada de dexpantenol em ambos os olhos e limpe a pele e o pelo ao redor com um agente desinfetante.
2. Modelo de fototrombose
- Faça uma incisão longitudinal de 2,0-2,5 cm e retraia para expor o crânio. Realize a exposição do crânio com um único corte para evitar complicações da ferida.
- Remova o periósteo suavemente com algodão e identifique as suturas coronais.
- Coloque os óculos de proteção, ligue o laser de 561 nm e marque o bregma +3 mm à esquerda.
- Desligue o laser, cole um adesivo com um orifício de 4 mm de diâmetro colocado nas coordenadas marcadas mencionadas acima.
- Injete no camundongo Rosa de Bengala (10 μL / g), por via intraperitoneal. Coloque o feixe de laser a 4-5 cm do crânio, ligue o laser de 561 nm e ilumine o crânio por 20 min.
- Aplique duas gotas de soro fisiológico a 0,9% no crânio para reidratar, suturar a ferida e colocar o animal em uma câmara de recuperação a 37 °C para se recuperar da anestesia. Após 1 h, retorne os ratos às suas gaiolas em uma sala com temperatura controlada.
- Injete analgesia a cada 12 h por 3 dias após a cirurgia (4 mg/kg de Carprofeno e 0,1 mg/kg de Buprenorfina).