Modelagem de AVC Fototrombótico em Modelo de Camundongo: Uma Técnica de Iluminação a Laser Através do Crânio de Camundongo Após Administração de Corante Fotossensível para Induzir Fototrombose

Resumo

Fonte: Llovera, G. et al. Modelagem de AVC em camundongos: lesões corticais focais por fototrombose. J. Vis. Exp. (2021)

Este vídeo demonstra o procedimento para gerar AVC fototrombótico em um modelo de camundongo por iluminação a laser de um crânio intacto após a administração de corante fotossensível.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação do animal

1. Injete analgesia 30 min antes da cirurgia (4 mg/kg de Carprofeno e 0,1 mg/kg de Buprenorfina).
2. Registre o peso corporal do camundongo para ajustar a dose de Rose Bengal a ser injetada (10 μL / g, ou seja, 100 μg / g).
3. Coloque o camundongo na câmara de indução com uma taxa de fluxo de isoflurano de 4% para anestesiá-lo até que o movimento espontâneo do corpo e as vibrissas parem.
4. Transfira o mouse para o quadro estereotáxico e coloque-o em decúbito ventral com o nariz na máscara de anestesia. Fixar o animal e manter a concentração de isoflurano a 4% por 1 min. Em seguida, reduza e mantenha a concentração de isoflurano em 2%.
5. Insira suavemente a sonda retal para monitorar a temperatura durante os procedimentos cirúrgicos. Defina a almofada de aquecimento controlada por feedback associada para manter a temperatura corporal do mouse em 37 °C.
6. Aplique a pomada de dexpantenol em ambos os olhos e limpe a pele e o pelo ao redor com um agente desinfetante.

2. Modelo de fototrombose

1. Faça uma incisão longitudinal de 2,0-2,5 cm e retraia para expor o crânio. Realize a exposição do crânio com um único corte para evitar complicações da ferida.
2. Remova o periósteo suavemente com algodão e identifique as suturas coronais.
3. Coloque os óculos de proteção, ligue o laser de 561 nm e marque o bregma +3 mm à esquerda.
4. Desligue o laser, cole um adesivo com um orifício de 4 mm de diâmetro colocado nas coordenadas marcadas mencionadas acima.
5. Injete no camundongo Rosa de Bengala (10 μL / g), por via intraperitoneal. Coloque o feixe de laser a 4-5 cm do crânio, ligue o laser de 561 nm e ilumine o crânio por 20 min.
6. Aplique duas gotas de soro fisiológico a 0,9% no crânio para reidratar, suturar a ferida e colocar o animal em uma câmara de recuperação a 37 °C para se recuperar da anestesia. Após 1 h, retorne os ratos às suas gaiolas em uma sala com temperatura controlada.
7. Injete analgesia a cada 12 h por 3 dias após a cirurgia (4 mg/kg de Carprofeno e 0,1 mg/kg de Buprenorfina).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Laser de comprimento de onda de 561 nm	Solna	Cobolt HS-03
Camundongos C57Bl/6J	Rio Charles	Episódio 664
Colímetro	Thorlabs	F240APC-A
Cotons	NOBA Verbondmitel Danz	974116
Etanol 70%	CLN Chemikalien Laborbedorf	521005
Tesoura fina	Festa	15000-00
fórceps	Festa	11616-15
Manta de aquecimento	Controlador de temperatura FHC DC	40-90-8D
Isoflurano	abade	B506
Óculos de proteção	Laser 2000	NIR-ZS2-38
Rosa Bengala	Sigma Aldrich	198250-5G
Solução salina	Braun	131321
Quadro estereotáxico	Stoelting	51500U
Sistema de anestesia para isoflurano	Drager
Fosfato tamponado com solução salina PH: 7,4	Apotheke Innestadt Uni München	Pág. 32799