Modelo Murino de Transplante de Ilhotas: Um Método Cirúrgico para Infundir Ilhotas Pancreáticas na Veia Portal e Prevenção de Sangramento Pós-Operatório

Resumo

Fonte: Gou, W. et al. Minimizando o sangramento da veia porta pós-infusão durante o transplante intra-hepático de ilhotas em camundongos. J. Vis. Exp. (2021)

Neste vídeo, descrevemos um procedimento para infundir células das ilhotas pancreáticas na veia porta hepática, seguido pela aplicação de espuma de gel para prevenir o sangramento com sucesso. O sangramento pós-operatório é uma causa comum de alta mortalidade durante o transplante de ilhotas.

Protocolo

1. Transplante de ilhotas

1. Induza e mantenha o camundongo sob anestesia geral com isoflurano a 2%. Verifique a falta de reflexos pedais para garantir a anestesia adequada do animal.
2. Raspe e remova o pelo na área do abdômen do mouse.
3. Administre uma dose pré-operatória única de buprenorfina (0,1 mg/kg i.p.).
4. Desinfete a área cirúrgica com três lenços alternados de iodo a 2% e álcool a 75%.
5. Realize uma laparotomia com microtesoura para gerar uma incisão de 1-1,5 cm.
6. Abra a cavidade peritoneal com um retrator. Siga com o método A ou o método B, conforme detalhado abaixo.

Método A: (pare de sangrar com espuma de gel, Figura 1A)

1. Preparação do mouse
   1. Coloque uma gaze estéril ao redor da incisão.
   2. Puxe suavemente o intestino usando uma pinça e mantenha-o na gaze.
   3. Identifique a veia porta por sua localização e exponha-a bem.
   4. Cubra o intestino com uma gaze morna e úmida durante toda a cirurgia.
2. Insira a agulha da seringa de insulina pré-carregada com ilhotas através da veia porta perto do duodeno (Figura 1B). Para fazer isso, segure a agulha com o orifício (chanfro) voltado para baixo e posicione o ângulo da superfície de abertura paralelo à parede da veia porta antes de penetrar na parede.
   1. Puxe o êmbolo para aspirar um pouco de sangue (20-50 μL) para a seringa para misturar primeiro as ilhotas.
   2. Infunda as ilhotas na veia porta lentamente enquanto puxa e empurra repetidamente o mergulho.
   3. Coloque um pedaço de espuma de gel (cerca de 0,5 cm x 0,5 cm de tamanho) para cobrir o local da injeção.
   4. Pressione a espuma de gel para baixo com uma ponta de algodão enquanto puxa a agulha da veia porta.
   5. Continue pressionando o gel por cerca de 2 minutos para confirmar que não há sangramento ativo.
   6. Role a ponta de algodão para cima e para longe da espuma de gel para garantir que a espuma de gel cubra bem a veia porta.

Método B: (pare de sangrar com compressa gordurosa, Figura 1C)

1. Exponha completamente a veia porta.
   1. Use duas pontas de algodão para segurar a veia porta exposta dos lados esquerdo e direito.
   2. Identifique a almofada de tecido adiposo entre o duodeno e a veia porta.
   3. Penetre através da almofada de gordura antes de inserir a agulha na veia porta (Figura 1D).
   4. Infundir os ilhéus, seguindo o procedimento semelhante descrito acima no método A.
   5. Puxe a agulha enquanto pressiona a gordura com uma ponta de algodão.
   6. Continue pressionando a almofada de gordura por 1 min após remover a agulha.
2. Depois de confirmar que não há sangramento da veia porta, retorne suavemente o intestino à cavidade peritoneal em sua posição original.
3. Deixe 0,5 mL de solução salina morna (36-37 °C) na cavidade abdominal antes do fechamento.
   nota: A solução salina quente facilita o movimento e a recuperação do intestino pós-operatório e previne a necrose intestinal.
4. Feche a camada muscular com uma sutura 5-0.
5. Feche a camada de pele com uma sutura 4-0.
6. Coloque o mouse em uma gaiola limpa em uma almofada de aquecimento até que esteja totalmente recuperado da anestesia.
7. Continue a fornecer um analgésico (por exemplo, buprenorfina 0,1 mg/kg i.p.) a cada 12 h e calor suplementar por 48 h após a cirurgia.
   NOTA: O procedimento de transplante de ilhotas leva aproximadamente 15-20 minutos para ser concluído.

Resultados

Figura 1: Ilustração dos procedimentos de transplante de ilhotas intra-hepáticas.(A, C). Esquemas das principais etapas usadas no Método A e no Método B. (B, D). As ilhotas foram injetadas diretamente pela veia porta (C) ou indiretamente por tapinha de gordura (D).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
10% de formalina tamponada neutra v/v	Fisher Científico	23426796
Seringa de 1 mL com agulha	Ahs	AH01T
Seringa de 20 mL	Bd	301031
Agulhas hipodérmicas 25G x 5/8"	Bd	305122
Almofadas de preparação de álcool, estéreis	Fisher Científico	22-363-750
Sistema de anestesia animal	VetEquip, Inc.	Inc. 901806
Cloridrato de buprenorfina, injeção	Produtos Estéreis LLC	NDC 42023-179-05
Etanol absoluto (200 provas), grau de biologia molecular	Fisher Científico	BP2818500
Tesoura de dissecação micro extra fina 4" reta afiada	Roboz Instrumento Cirúrgico Co.	RS-5882
Gelfoam (esponja de gelatina absorvível USP)	Empresa Pharmacia & Upjohn	Rolamento 34201
Pinça Graefe 4" ponta extra delicada	Roboz Instrumento Cirúrgico Co.	RS-5136
Almofada aquecida	amazona	B07HMKMBKM
Porta-agulhas Hegar-Baumgartner 5.25"	Roboz Instrumento Cirúrgico Co.	RS-7850
Seringa de insulina com agulha de calibre 27	Bd	879588
Almofadas de preparação de iodo	Fisher Científico	19-027048
Isoflurano	Cuidados Intensivos Piramal	NDC 66794-017-25
Sutura de polipropileno 4-0	Med-Vet Internacional	MV-8683
Sutura de polipropileno 5-0	Med-Vet Internacional	MV-8661
Cloreto de sódio, solução intravenosa a 0,9%	VWR	2B1322Q
Campo cirúrgico, estéril	Med-Vet Internacional	DR1826